| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 生物农药概述 | 第12页 |
| 1.2 尼莫克汀概述 | 第12-16页 |
| 1.2.1 尼莫克汀理化性质 | 第12-13页 |
| 1.2.2 尼莫克汀的生物合成及其研究现状 | 第13-16页 |
| 1.3 高通量筛选全合成培养基 | 第16-18页 |
| 1.3.1 高通量技术概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 全合成培养基概述 | 第17页 |
| 1.3.3 高通量筛选全合成培养基 | 第17-18页 |
| 1.4 发酵过程优化 | 第18-19页 |
| 1.4.1 溶氧与剪切优化 | 第18-19页 |
| 1.4.2 基于在线参数的补料策略优化 | 第19页 |
| 1.5 代谢物组学研究 | 第19-20页 |
| 1.6 课题研究的背景、意义和内容 | 第20-22页 |
| 1.6.1 课题研究的背景和意义 | 第20-21页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 材料与方法 | 第22-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌种 | 第22页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 常用试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 培养基配方 | 第24-25页 |
| 2.2 培养方法 | 第25-26页 |
| 2.2.1 斜面培养 | 第25页 |
| 2.2.2 一级种子培养 | 第25页 |
| 2.2.3 二级种子培养 | 第25页 |
| 2.2.4 孔板发酵培养 | 第25页 |
| 2.2.5 摇瓶发酵培养 | 第25-26页 |
| 2.2.6 5L发酵罐发酵培养 | 第26页 |
| 2.3 分析与测定方法 | 第26-30页 |
| 2.3.1 pH测定 | 第26页 |
| 2.3.2 菌体干重测定 | 第26页 |
| 2.3.3 葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量 | 第26-27页 |
| 2.3.3.1 葡萄糖标准曲线的制作 | 第26-27页 |
| 2.3.3.2 发酵液中葡糖糖浓度测定 | 第27页 |
| 2.3.4 铵离子浓度测定 | 第27-28页 |
| 2.3.4.1 实验主要测试试剂 | 第27-28页 |
| 2.3.4.2 铵离子标准曲线制作 | 第28页 |
| 2.3.4.3 发酵液中铵离子浓度测定 | 第28页 |
| 2.3.5 OUR和CER测定 | 第28-29页 |
| 2.3.6 尼莫克汀含量测定 | 第29页 |
| 2.3.7 菌体形态分析 | 第29-30页 |
| 第3章 尼莫克汀发酵全合成培养基的建立与优化 | 第30-43页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 材料与方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 单因素优化发酵培养基 | 第30-31页 |
| 3.2.1.1 碳源作用 | 第30页 |
| 3.2.1.2 氮源作用 | 第30页 |
| 3.2.1.3 磷源作用 | 第30-31页 |
| 3.2.2 显著因子的确定 | 第31-32页 |
| 3.2.3 最佳培养基配方确定 | 第32-33页 |
| 3.2.4 5L发酵罐验证 | 第33页 |
| 3.2.5 高通量检测平台建立 | 第33页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第33-41页 |
| 3.3.1 孔板装液量确定 | 第33页 |
| 3.3.2 高通量检测平台建立 | 第33-35页 |
| 3.3.3 葡萄糖浓度对尼莫克汀发酵的影响 | 第35页 |
| 3.3.4 麦芽糖浓度对尼莫克汀发酵的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.5 氮源对尼莫克汀发酵的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.6 磷酸氢二钾对尼莫克汀发酵影响 | 第37-38页 |
| 3.3.7 显著因素的确定 | 第38页 |
| 3.3.8 最佳培养基配方确定 | 第38-40页 |
| 3.3.9 5L发酵罐验证 | 第40-41页 |
| 3.4 本章小结 | 第41-43页 |
| 第4章 基于在线参数调控的尼莫克汀发酵过程优化 | 第43-57页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 材料与方法 | 第43-44页 |
| 4.2.1 菌种和培养基 | 第43-44页 |
| 4.2.1.1 菌种 | 第43页 |
| 4.2.1.2 斜面培养基以及种子培养基 | 第43页 |
| 4.2.1.3 5L发酵培养基 | 第43-44页 |
| 4.2.2 培养方法 | 第44页 |
| 4.2.2.1 5L发酵罐发酵培养 | 第44页 |
| 4.2.2.2 葡萄糖和硫酸铵的补料策略 | 第44页 |
| 4.2.3 分析与测定方法 | 第44页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第44-56页 |
| 4.3.1 摇瓶装液量和玻璃珠数量对蓝灰色链霉菌发酵生产尼莫克汀的影响 | 第44-46页 |
| 4.3.2 5L发酵罐中转速和供氧水平对尼莫克汀生物合成的影响 | 第46-51页 |
| 4.3.3 在不同补糖策略下尼莫克汀发酵情况 | 第51-52页 |
| 4.3.4 在不同补铵策略下尼莫克汀发酵情况 | 第52-56页 |
| 4.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第5章 不同补铵策略对蓝灰色链霉菌发酵合成尼莫克汀影响机制的探索 | 第57-79页 |
| 5.1 引言 | 第57页 |
| 5.2 材料与方法 | 第57-66页 |
| 5.2.1 快速取样装置 | 第57-58页 |
| 5.2.2 提取方法 | 第58-60页 |
| 5.2.3 样品衍生 | 第60页 |
| 5.2.4 精确分析检测方法建立 | 第60-66页 |
| 5.2.4.1 GC-MS检测方法 | 第60-64页 |
| 5.2.4.2 LC-MS/MS检测方法 | 第64-66页 |
| 5.2.5 ~(13)C同位素标记品的制作 | 第66页 |
| 5.2.6 数据处理及分析 | 第66页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第66-78页 |
| 5.3.1 各类代谢物的最适提取方法 | 第66-67页 |
| 5.3.2 5L发酵罐中在不同补铵策略下菌体生长以及尼莫克汀合成情况 | 第67-68页 |
| 5.3.3 与尼莫克汀生物合成相关的关键代谢物和代谢途径 | 第68-70页 |
| 5.3.4 中心碳代谢途径与尼莫克汀生物合成的关系 | 第70-75页 |
| 5.3.5 氨基酸代谢尼莫克汀生物合成的关系 | 第75-76页 |
| 5.3.6 辅酶A类物质与尼莫克汀生物合成的关系 | 第76-78页 |
| 5.4 本章小结 | 第78-79页 |
| 第6章 全文结论与展望 | 第79-80页 |
| 6.1 全文总结 | 第79页 |
| 6.2 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读硕士期间撰写的论文及专利 | 第90-91页 |
| 附录Ⅰ | 第91-92页 |
