| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-36页 |
| 1.1 氧化还原调控 | 第15-16页 |
| 1.1.1 氧化还原调控的种类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 巯基/二硫键型氧化还原调控 | 第16页 |
| 1.2 巯基/二硫键氧化还原调控与信号因子 | 第16-21页 |
| 1.2.1 巯基/二硫键氧化还原调控与ROS | 第16-19页 |
| 1.2.2 巯基/二硫键氧化还原调控与ABA信号 | 第19-21页 |
| 1.3 巯基/二硫键氧化还原调控与光合作用 | 第21-27页 |
| 1.3.1 巯基/二硫键氧化还原调控与PSⅡ复合体的生成和组装 | 第21-25页 |
| 1.3.2 巯基/二硫键氧化还原调控与光合系统状态的转换 | 第25-27页 |
| 1.4 巯基/二硫键氧化还原调控与叶绿体蛋白的转运及氧化折叠 | 第27-28页 |
| 1.5 叶绿体中调控巯基/二硫键转换的酶系统 | 第28-32页 |
| 1.5.1 叶绿体中的还原酶系统 | 第28-30页 |
| 1.5.2 叶绿体中的氧化酶系统 | 第30-32页 |
| 1.6 维生素K环氧化物还原酶的研究 | 第32-35页 |
| 1.6.1 动物维生素K环氧化物还原酶的研究 | 第32-33页 |
| 1.6.2 微生物维生素K环氧化物还原酶的研究 | 第33-34页 |
| 1.6.3 植物维生素K环氧化物还原酶的研究 | 第34-35页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-59页 |
| 2.1 材料 | 第36-39页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第36页 |
| 2.1.3 酶、试剂盒与各种生化试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第37-38页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.2 方法 | 第39-59页 |
| 2.2.1 植物材料培养与处理 | 第39页 |
| 2.2.2 CTAB法提取拟南芥基因组DNA | 第39-40页 |
| 2.2.3 突变体纯合体的筛选 | 第40页 |
| 2.2.4 RNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.2.4.1 Trizol法提取拟南芥总RNA | 第40-41页 |
| 2.2.4.2 热酚法提取拟南芥总RNA | 第41页 |
| 2.2.5 cDNA第一条链的合成 | 第41-42页 |
| 2.2.6 目的基因的克隆及载体的构建 | 第42-45页 |
| 2.2.6.1 PCR扩增 | 第42页 |
| 2.2.6.2 DNA片段的回收 | 第42-43页 |
| 2.2.6.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| 2.2.6.4 目的片段与克隆载体的连接 | 第43页 |
| 2.2.6.5 质粒DNA转化大肠杆菌 | 第43-44页 |
| 2.2.6.6 转化菌落PCR鉴定及测序鉴定 | 第44页 |
| 2.2.6.7 质粒DNA的微量提取 | 第44-45页 |
| 2.2.6.8 目的片段和质粒DNA的酶切 | 第45页 |
| 2.2.6.9 目的片段和质粒DNA的连接 | 第45页 |
| 2.2.7 拟南芥转化 | 第45-47页 |
| 2.2.7.1 植物表达载体的构建 | 第45页 |
| 2.2.7.2 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| 2.2.7.3 质粒DNA转化农杆菌细胞 | 第46页 |
| 2.2.7.4 花絮滴定法侵染拟南芥 | 第46页 |
| 2.2.7.5 杂交法转化拟南芥 | 第46-47页 |
| 2.2.8 植物生理指标的测定 | 第47页 |
| 2.2.8.1 叶绿素荧光参数的测定 | 第47页 |
| 2.2.8.2 H_2O_2与O_2·~-含量的测定 | 第47页 |
| 2.2.9 核糖体RNA的Notrhern杂交分析 | 第47-50页 |
| 2.2.9.1 核糖体RNA的提取 | 第47-48页 |
| 2.2.9.2 甲醛变性凝胶电泳 | 第48页 |
| 2.2.9.3 核糖体RNA的转膜 | 第48-49页 |
| 2.2.9.4 核糖体RNA的杂交 | 第49-50页 |
| 2.2.10 核酸定量分析 | 第50-51页 |
| 2.2.10.1 半定量RT-PCR | 第50-51页 |
| 2.2.10.2 qRT-PCR分析 | 第51页 |
| 2.2.11 双向电泳分析及质谱鉴定 | 第51-53页 |
| 2.2.11.1 蛋白样品的制备 | 第51页 |
| 2.2.11.2 第一向等电聚焦 | 第51-52页 |
| 2.2.11.3 第二向SDS-PAGE电泳及染色脱色 | 第52页 |
| 2.2.11.4 差异蛋白点的选取及质谱鉴定 | 第52-53页 |
| 2.2.12 Western blot分析 | 第53-55页 |
| 2.2.12.1 叶绿体的提取 | 第53-54页 |
| 2.2.12.2 叶绿素含量的测定 | 第54页 |
| 2.2.12.3 类囊体的提取 | 第54页 |
| 2.2.12.4 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第54-55页 |
| 2.2.12.6 免疫检测 | 第55页 |
| 2.2.12.7 化学发光法检测蛋白质 | 第55页 |
| 2.2.13 蓝绿温和胶电泳 | 第55-56页 |
| 2.2.14 酵母双杂交分析 | 第56-57页 |
| 2.2.15 互作蛋白的表达纯化 | 第57-58页 |
| 2.2.15.1 互作蛋白的诱导表达 | 第57页 |
| 2.2.15.2 互作蛋白的亲和层析纯化 | 第57-58页 |
| 2.2.16 表面等离子共振检测AtDsbA与靶蛋白的体外互作 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-84页 |
| 3.1 vkor纯合体的筛选鉴定及表型特征 | 第59-60页 |
| 3.2 vkor-2转基因补偿植株的筛选鉴定 | 第60-62页 |
| 3.3 AtVKOR的亚细胞器定位 | 第62-63页 |
| 3.4 vkor-2蛋白质组水平分析 | 第63-69页 |
| 3.4.1 双向电泳结果及分析 | 第63-64页 |
| 3.4.2 质谱分析 | 第64-65页 |
| 3.4.3 qRT-PCR检测PsbP1、APX1、CAT2和DHAR1的表达水平 | 第65-69页 |
| 3.5 叶绿素荧光参数的测定 | 第69页 |
| 3.6 AtVKOR的缺失导致D1蛋白加速降解 | 第69-71页 |
| 3.7 ROS含量的检测 | 第71-74页 |
| 3.7.1 强光胁迫下ROS含量的检测 | 第71-73页 |
| 3.7.2 盐、干旱胁迫和ABA处理条件下ROS含量的检测 | 第73-74页 |
| 3.8 ABA信号转导途径的分析 | 第74-79页 |
| 3.8.1 盐、干旱胁迫和ABA处理条件下AnnAt1的转录水平检测 | 第74-75页 |
| 3.8.2 Western blot检测AnnAt1的翻译水平 | 第75-76页 |
| 3.8.3 盐、干旱胁迫和ABA处理条件下AREBs/ABFs转录水平的检测 | 第76-78页 |
| 3.8.4 盐、干旱胁迫和ABA处理条件下RD29B转录水平的检测 | 第78-79页 |
| 3.9 AtVKOR互作蛋白的筛选鉴定 | 第79-82页 |
| 3.9.1 类囊体腔中潜在互作蛋白的选取 | 第79页 |
| 3.9.2 酵母双杂交筛选互作蛋白 | 第79-82页 |
| 3.10 AtVKOR与靶蛋白相互作用的研究 | 第82-84页 |
| 3.10.1 互作蛋白基因的克隆及原核表达载体的构建 | 第82页 |
| 3.10.2 AtDsbA及互作蛋白的诱导表达及分离纯化 | 第82-83页 |
| 3.10.3 AtDsbA与靶蛋白的体外互作分析 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-88页 |
| 4.1 AtVKOR在植株光合生长中的作用 | 第84页 |
| 4.2 AtVKOR在细胞ROS调控中的作用 | 第84-85页 |
| 4.3 AtVKOR在叶绿体ABA信号转导中的作用 | 第85-87页 |
| 4.4 AtVKOR在催化叶绿体类囊体腔蛋白氧化折叠中的作用 | 第87-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第110页 |
