| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一部分 Beclin1 基因的选择性剪接研究 | 第13-38页 |
| 1 材料 | 第14-16页 |
| 1.1 实验材料 | 第14页 |
| 1.2 实验试剂 | 第14-15页 |
| 1.3 主要仪器和器材 | 第15-16页 |
| 2 方法 | 第16-30页 |
| 2.1 RT-PCR 法从 697 细胞系总 RNA 中分离 Beclin1 基因的 cDNA | 第16-18页 |
| 2.2 构建 Lenti- GFP-Beclin1、Lenti-GFP-Del-E11 融合基因的慢病毒表达载体 | 第18-24页 |
| 2.3 Lenti-GFP、Lenti-GFP-Beclin1/ Del-E11 和 pLenti-Beclin1/ Del-E11 慢病毒载体的病毒包装、滴度测定、细胞侵染及阳性分选 | 第24-26页 |
| 2.4 GFP-Beclin1、GFP-Del-E11 融合蛋白的亚细胞定位 | 第26页 |
| 2.5 697-Beclin1 和 697-Del-E11 细胞自噬活性的检测 | 第26-30页 |
| 3 结果 | 第30-35页 |
| 3.1 697 细胞系的总 RNA 提取结果 | 第30-31页 |
| 3.2 载体鉴定 | 第31-33页 |
| 3.3 GFP-Beclin1、GFP-Del-E11 合蛋白 亚细 定位 | 第33-34页 |
| 3.4 式细 选结 western blot 步检 结 | 第34-35页 |
| 3.5 免疫共沉淀结果 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 第二部分 Beclin1 基因条件敲除小鼠的建立 | 第38-57页 |
| 1 材料 | 第39-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 1.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 1.3 主要仪器和器材 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-50页 |
| 2.1 NeoR滋养层细胞的制备 | 第42页 |
| 2.2 Beclin1 打靶载体的转化、扩大培养及线性化 | 第42-44页 |
| 2.3 小鼠 ES 细胞的培养、电穿孔及阳性克隆的耐药筛选和鉴定 | 第44-47页 |
| 2.4 阴道脱落细胞法判定雌鼠动情周期 | 第47页 |
| 2.5 小鼠胚胎的获取与培养 | 第47-48页 |
| 2.6 囊胚的显微注射 | 第48页 |
| 2.7 假孕雌鼠的制备 | 第48-49页 |
| 2.8 胚胎移植 | 第49页 |
| 2.9 嵌合体的筛选 | 第49页 |
| 2.10 N4 代 Beclin1~(f/+)小鼠的基因型的鉴定与繁育 | 第49页 |
| 2.11 Vav-Beclin1~(+/-)小鼠的鉴定 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-55页 |
| 3.1 动情周期各阶段阴道脱落细胞的特点 | 第50-51页 |
| 3.2 中靶 ES 细胞的阳性鉴定 | 第51-53页 |
| 3.3 嵌合体的筛选与繁育 | 第53-54页 |
| 3.4 N4 代 Beclin1~(f/+)小鼠鉴定结果 | 第54页 |
| 3.5 Vav-Beclin1~(+/-)小鼠的鉴定 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 综述 | 第66-80页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 攻读硕士期间本人出版或公开发表的论著、论文 | 第80-81页 |
| 附录 | 第81-82页 |
| 缩略词表 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
