| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-35页 |
| 1.1 病毒诱导的基因沉默（VIGS）技术 | 第9-15页 |
| 1.1.1 病毒诱导的基因沉默（VIGS）作用机制 | 第10页 |
| 1.1.2 病毒诱导的基因沉默（VIGS）的操作技术 | 第10-13页 |
| 1.1.3 病毒诱导的基因沉默（VIGS）的优缺点 | 第13-15页 |
| 1.2 多聚半乳糖醛酸酶（PG） | 第15-21页 |
| 1.2.1 多聚半乳糖醛酸酶（PG）种类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 多聚半乳糖醛酸酶（PG）基因及其表达调控 | 第16-18页 |
| 1.2.3 多聚半乳糖醛酸酶（PG）在果实成熟软化过程中的作用 | 第18-19页 |
| 1.2.4 植物激素对多聚半乳糖醛酸酶（PG）的调节 | 第19-20页 |
| 1.2.5 多聚半乳糖醛酸酶（PG）的其他功能 | 第20-21页 |
| 1.3 乙烯及其生物合成 | 第21-27页 |
| 1.3.1 乙烯与番茄果实成熟 | 第21-22页 |
| 1.3.2 乙烯的生物合成 | 第22-24页 |
| 1.3.3 ACS（ACC 合酶）的分子生物学及其对乙烯的调控 | 第24-27页 |
| 1.4 Real Time PCR 技术 | 第27-31页 |
| 1.4.1 Real Time PCR 技术原理 | 第27-28页 |
| 1.4.2 利用Real Time PCR 定量优势 | 第28-29页 |
| 1.4.3 Real Time PCR 荧光染料——SYBR GreenⅠ | 第29-30页 |
| 1.4.4 确定样品起始模板拷贝数的2 类方法 | 第30页 |
| 1.4.5 利用2???CT 方法分析相对定量Real Time PCR 结果 | 第30-31页 |
| 1.5 研究目的、意义及内容 | 第31-35页 |
| 1.5.1 PG 与乙烯关系的研究现状 | 第31-32页 |
| 1.5.2 研究目的及意义 | 第32页 |
| 1.5.3 实验内容及路线 | 第32-35页 |
| 第二章 烟草脆裂病毒空载体的验证 | 第35-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-40页 |
| 2.1.1 菌株 | 第35页 |
| 2.1.2 酶及试剂 | 第35页 |
| 2.1.3 常用试剂配制 | 第35-37页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第37页 |
| 2.1.5 实验方法 | 第37-40页 |
| 2.2 结论与讨论 | 第40-43页 |
| 2.2.1 农杆菌GV3101 中烟草脆裂病毒质粒DNA 的小量制备 | 第40-41页 |
| 2.2.2 大肠杆菌中烟草脆裂病毒质粒DNA 的小量制备 | 第41-42页 |
| 2.2.3 大肠杆菌中烟草脆裂病毒质粒的PCR 验证 | 第42-43页 |
| 2.3 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 重组病毒载体TRV-PG 的构建 | 第44-62页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-50页 |
| 3.1.1 菌株 | 第44页 |
| 3.1.2 酶及试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.3 常用试剂的配制 | 第45页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第45页 |
| 3.1.5 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第50-60页 |
| 3.2.1 两端带有XbaI、KpnI 酶切位点的PG 基因片段的获得 | 第50页 |
| 3.2.2 两端带有XbaI、KpnI 酶切位点的PG 基因片段的回收 | 第50-52页 |
| 3.2.3 重组T 载体向感受态大肠杆菌转化后质粒DNA 的小量制备 | 第52-53页 |
| 3.2.4 大肠杆菌中重组T 载体质粒的双酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.5 目的基因片段测序验证 | 第54-55页 |
| 3.2.6 重组T 载体质粒和烟草脆裂病毒TRV2 质粒的双酶切 | 第55-56页 |
| 3.2.7 重组T 载体质粒和烟草脆裂病毒TRV2 质粒目的片段的回收 | 第56-57页 |
| 3.2.8 大肠杆菌中重组病毒载体TRV-PG 质粒的双酶切鉴定 | 第57-58页 |
| 3.2.9 重组病毒载体TRV-PG 质粒向感受态农杆菌转化后质粒DNA 的小量制备 | 第58-59页 |
| 3.2.10 农杆菌中重组病毒载体TRV-PG 质粒回转感受态大肠杆菌后质粒DNA 的小量制备 | 第59-60页 |
| 3.2.11 大肠杆菌中重组病毒载体TRV-PG 质粒的双酶切验证 | 第60页 |
| 3.3 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 病毒诱导的基因沉默侵染方法及条件的确定 | 第62-67页 |
| 4.1 材料与方法 | 第63-64页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第63页 |
| 4.1.2 试剂 | 第63页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第63页 |
| 4.1.4 实验方法 | 第63-64页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第64-65页 |
| 4.3 本章小结 | 第65-67页 |
| 第五章 病毒诱导的基因沉默效果的分子检测 | 第67-84页 |
| 5.1 材料与方法 | 第67-71页 |
| 5.1.1 酶及试剂 | 第67页 |
| 5.1.2 常用试剂的配制 | 第67-68页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第68页 |
| 5.1.4 实验方法 | 第68-71页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第71-82页 |
| 5.2.1 不同处理组番茄果实总RNA 的提取 | 第71-72页 |
| 5.2.2 不同处理组番茄果实总RNA 的消化 | 第72页 |
| 5.2.3 不同处理组番茄果实cDNA 的验证 | 第72-74页 |
| 5.2.4 应用于Real Time PCR 实验PG、ACS2、actin 引物的验证 | 第74-76页 |
| 5.2.5 不同处理组番茄果实cDNA 的Real Time PCR | 第76-82页 |
| 5.3 本章小结 | 第82-84页 |
| 第六章 目的基因沉默番茄果实的生理变化 | 第84-92页 |
| 6.1 材料与方法 | 第84-87页 |
| 6.1.1 试剂 | 第84页 |
| 6.1.2 常用试剂的配制 | 第84-85页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第85页 |
| 6.1.4 实验方法 | 第85-87页 |
| 6.2 结果与讨论 | 第87-91页 |
| 6.2.1 不同处理组番茄果实ACC 合酶（ACS）活性 | 第87-88页 |
| 6.2.2 不同处理组番茄果实多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性 | 第88-89页 |
| 6.2.3 不同处理组番茄果实乙烯含量 | 第89-91页 |
| 6.3 本章小结 | 第91-92页 |
| 第七章 结论与展望 | 第92-94页 |
| 7.1 结论 | 第92页 |
| 7.2 展望 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-99页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
