| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第12-18页 |
| 1.1.1 病原学 | 第12页 |
| 1.1.2 分子生物学特性 | 第12-18页 |
| 1.2 反向遗传学 | 第18-20页 |
| 1.2.1 PRRSV的反向遗传学 | 第18页 |
| 1.2.2 PRRSV反向遗传的操作 | 第18-19页 |
| 1.2.3 PRRSV感染性克隆的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 PRRSV HuN4株和CH-1a株感染性克隆的构建 | 第21-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-28页 |
| 2.1.1 细胞，病毒，载体 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.1.4 引物合成 | 第22-23页 |
| 2.1.5 分段扩增HuN4、CH-1a的各片段 | 第23-24页 |
| 2.1.6 PRRSV HuN4和CH-1a株各片段的连接 | 第24-25页 |
| 2.1.7 病毒的拯救及鉴定 | 第25-28页 |
| 2.1.7.1 重组质粒转染Marc-145细胞 | 第25-26页 |
| 2.1.7.2 观察拯救病毒的细胞病变 | 第26页 |
| 2.1.7.3 核酸的鉴定 | 第26页 |
| 2.1.7.4 分子标记的鉴定 | 第26页 |
| 2.1.7.5 免疫荧光鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.7.6 Western Blot鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2 结果 | 第28-31页 |
| 2.2.1 pOKCA53载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.2 构建pOK-HuN4全长各片段的PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2.3 全长pOK-HuN4，pOK-CH的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.4 拯救病毒的细胞病变的观察 | 第29页 |
| 2.2.5 病毒核酸的检测 | 第29-30页 |
| 2.2.6 分子标记的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.7 免疫荧光鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.8 Western blot鉴定 | 第31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 PRRSV HuN4株和CH-1a株嵌合毒的构建 | 第33-38页 |
| 3.1 材料和方法 | 第33-34页 |
| 3.1.1 病毒和细胞 | 第33页 |
| 3.1.2 PRRSV HuN4株和CH-1a株嵌合毒的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.3 病毒的拯救及鉴定 | 第34页 |
| 3.1.4 观察拯救病毒的细胞病变 | 第34页 |
| 3.1.5 核酸的鉴定 | 第34页 |
| 3.1.6 免疫荧光鉴定 | 第34页 |
| 3.1.7 进行Western blot鉴定 | 第34页 |
| 3.2 结果 | 第34-37页 |
| 3.2.1 拯救病毒的细胞病变的观察 | 第34-35页 |
| 3.2.2 病毒核酸的检测 | 第35-36页 |
| 3.2.3 免疫荧光鉴定 | 第36页 |
| 3.2.4 Western Blot的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3 讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 表达海肾荧光素酶的PRRSV嵌合病毒构建的应用 | 第38-43页 |
| 4.1 材料和方法 | 第38-40页 |
| 4.1.1 质粒和细胞 | 第38页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第38页 |
| 4.1.3 pOK-HuN4中插入海肾荧光素酶报告基因 | 第38-39页 |
| 4.1.4 pOK-HuN4-Rlu的PCR和酶切鉴定 | 第39页 |
| 4.1.5 pOK-HuN4-Rlu拯救 | 第39页 |
| 4.1.6 pOK-HuN4-Rlu免疫荧光鉴定 | 第39页 |
| 4.1.7 海肾荧光素酶信号的检测 | 第39-40页 |
| 4.2 结果 | 第40-41页 |
| 4.2.1 带有海肾荧光素酶的pOK-HuN4-Rlu的构建 | 第40页 |
| 4.2.2 pOK-HuN4-Rlu的PCR和酶切鉴定 | 第40页 |
| 4.2.3 pOK-HuN4-Rlu免疫荧光鉴定 | 第40-41页 |
| 4.2.4 海肾荧光素酶分析结果 | 第41页 |
| 4.3 讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简历 | 第52页 |
