| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| Abbreviation | 第11-14页 |
| CHAPTER 1. INTRODUCTION | 第14-24页 |
| 1.1 COTTON, GOSSYPIUM | 第14-15页 |
| 1.1.1 Importance of cotton | 第14-15页 |
| 1.2 GENOME EDITING | 第15-16页 |
| 1.3 RNA-GUIDED ENDONUCLEASES (CRISPR/CAS9) | 第16-20页 |
| 1.4 SITE-DIRECTED MUTAGENESIS | 第20-21页 |
| 1.5 CHROMOSOME ENGINEERING | 第21-22页 |
| 1.6 TARGETING CENH3, RAD21 AND DMC1 GENES | 第22-23页 |
| 1.7 AIM AND SIGNIFICANCE | 第23-24页 |
| CHAPTER 2 MATERIALS AND METHODS | 第24-32页 |
| 2.1 PLANT MATERIAL | 第24页 |
| 2.2 PLASMID VECTORS | 第24页 |
| 2.3 BACTERIAL CULTURES | 第24-25页 |
| 2.3.1 Luria Bertani (LB) broth | 第24页 |
| 2.3.2 Maxi prep samples of vectors plasmids | 第24-25页 |
| 2.4 SELECTION OF TARGET SEQUENCES | 第25-27页 |
| 2.4.1 Finding CRISPR sites | 第25页 |
| 2.4.2 Oligo Primer design and synthesis | 第25-27页 |
| 2.5 CLONING | 第27-30页 |
| 2.5.1 gRNA-AtU | 第27-30页 |
| 2.5.2 g RNA sequence ligation into CRISPR/cas9 plasmid | 第30页 |
| 2.6 COLONY PCR | 第30页 |
| 2.7 EXTRACTION OF CRISPR/CAS9 PLASMID | 第30-31页 |
| 2.8 PROTOPLAST ISOLATION | 第31-32页 |
| 2.8.1 Enzyme solution for leaf digestion | 第31页 |
| 2.8.2 10% PEG solution | 第31-32页 |
| CHAPTER 3. RESULTS | 第32-40页 |
| 3.1. TARGET SELECTION | 第32-33页 |
| 3.2. OLIGO PRIMER DESIGN AND CLONING OF TARGET ADAPTORS INTO GRNA ENTRY VECTORS | 第33-35页 |
| 3.3. CLONING GRNA AND CRISPR VECTOR CLONING | 第35-37页 |
| 3.4. PROTOPLAST ISOLATION | 第37-38页 |
| 3.5. PEG PROTOPLAST TRANSFORMATION | 第38-39页 |
| 3.6. MUTATION DETECTION | 第39-40页 |
| CHAPTER 4 DISCUSSIONS | 第40-41页 |
| CONCLUSION | 第41-43页 |
| REFERENCES | 第43-47页 |
| APPENDICES | 第47-55页 |
| APPENDIX 1: PROMOTER AND GENE SEQUENCES | 第47-51页 |
| APPENDIX 2: REAGENTS AND RECIPES | 第51-53页 |
| Appendix 3: Endo Free Maxi Plasmid Kit (Tiangen, China) | 第53-55页 |
| Acknowledgements | 第55-56页 |
| CURRICULUM VITAE | 第56页 |
