| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第10-28页 |
| 1.1 膜蛋白、膜转运蛋白及其分类 | 第10-12页 |
| 1.2 膜蛋白结构研究的方法 | 第12-13页 |
| 1.3 蛋白表达优化 | 第13-18页 |
| 1.3.1 表达载体的构建 | 第13-15页 |
| 1.3.2 表达标签的选择 | 第15-17页 |
| 1.3.3 表达菌株的选择 | 第17页 |
| 1.3.4 表达条件的优化 | 第17-18页 |
| 1.4 膜蛋白结构和功能的研究技术 | 第18-24页 |
| 1.4.1 圆二色谱 | 第18-20页 |
| 1.4.2 等温滴定量热技术 | 第20-21页 |
| 1.4.3 傅里叶变换红外光谱法 | 第21-23页 |
| 1.4.4 核磁共振技术 | 第23-24页 |
| 1.5 MrpF及其亚基和它们的研究现状 | 第24-26页 |
| 1.6 课题研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第26页 |
| 1.6.2 研究目的 | 第26-27页 |
| 1.6.3 研究意义 | 第27-28页 |
| 第2章 材料和方法 | 第28-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第30页 |
| 2.1.4 实验过程中所用的培养基 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-46页 |
| 2.2.1 引物的设计 | 第31-32页 |
| 2.2.2 构建重组质粒 | 第32-37页 |
| 2.2.3 反向PCR | 第37-38页 |
| 2.2.4 感受态细胞的转化和制备 | 第38-40页 |
| 2.2.5 重组蛋白的表达纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.6 MBP-Intein-MrpF的自剪切 | 第41-42页 |
| 2.2.7 圆二色谱 | 第42-43页 |
| 2.2.8 红外光谱 | 第43页 |
| 2.2.9 液体核磁共振技术 | 第43-44页 |
| 2.2.10 等温滴定微量量热法 | 第44-46页 |
| 第3章 内含肽介导的MrpF的纯化 | 第46-52页 |
| 3.1 重组蛋白MBP-Intein-MrpF表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 3.1.1 分别提取质粒模板质粒pTWIN和表达载体pCYK | 第46-47页 |
| 3.1.2 普通PCR扩增Intein片段 | 第47-48页 |
| 3.1.3 酶切和纯化 | 第48页 |
| 3.1.4 转化和菌落PCR验证阳性克隆 | 第48-49页 |
| 3.1.5 测序结果 | 第49页 |
| 3.2 重组蛋白MBP-Intein-MrpF的表达纯化及诱导切割 | 第49-51页 |
| 3.2.1 重组蛋白的表达纯化 | 第49-50页 |
| 3.2.2 诱导内含肽的自切割 | 第50-51页 |
| 3.3 小结 | 第51-52页 |
| 第4章 His标签介导的MrpF的纯化 | 第52-61页 |
| 4.1 融合蛋白His-MrpF和MrpF-His表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.1.1 普通PCR扩增MrpF片段 | 第52-53页 |
| 4.1.2 双酶切及连接 | 第53-54页 |
| 4.1.3 筛选阳性克隆 | 第54页 |
| 4.2 融合蛋白His-MrpF和MrpF-His的表达和纯化 | 第54-60页 |
| 4.2.1 表达菌株的筛选 | 第54-55页 |
| 4.2.2 表达温度和表达时间的筛选 | 第55-56页 |
| 4.2.3 诱导时菌体密度的筛选 | 第56-58页 |
| 4.2.4 最适碳源种类及其浓度的确定 | 第58-59页 |
| 4.2.5 营养物质的添加对蛋白表达量的影响 | 第59-60页 |
| 4.3 小结 | 第60-61页 |
| 第5章 MrpF结构和功能的研究 | 第61-68页 |
| 5.1 CD对MrpF二级结构的研究 | 第61-62页 |
| 5.2 FTIR对MrpF二级结构的研究 | 第62-63页 |
| 5.3 液体核磁对MrpF和胆酸钠相互作用的研究 | 第63-64页 |
| 5.4 ITC对MrpF和胆酸钠相互作用的研究 | 第64-66页 |
| 5.5 小结 | 第66-68页 |
| 第6章 MrpF固体核磁三维结构解析的初步尝试 | 第68-72页 |
| 6.1 去垢剂的筛选 | 第69页 |
| 6.2 MrpF的脂膜重建 | 第69-70页 |
| 6.3 小结 | 第70-72页 |
| 第7章 结果与展望 | 第72-75页 |
| 7.1 结果 | 第72-74页 |
| 7.1.1 成功表达纯化MBP-Intein-Mrp F的融合蛋白 | 第72页 |
| 7.1.2 成功实现MrpF的异源超量表达 | 第72-73页 |
| 7.1.3 研究MrpF二级结构的同时验证MrpF和胆酸钠的相互作用 | 第73页 |
| 7.1.4 初步尝试利用固体核磁解析三维结构 | 第73-74页 |
| 7.2 展望 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 攻读学位期间获得与学位论文相关科研成果目录 | 第81页 |
