| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第15-34页 |
| 1.1 亚氨基二乙酸 | 第15-18页 |
| 1.1.1 亚氨基二乙酸的研究概况 | 第15-16页 |
| 1.1.2 亚氨基二乙酸的合成 | 第16-17页 |
| 1.1.2.1 亚氨基二乙酸的化学合成 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 亚氨基二乙酸的生物合成 | 第17页 |
| 1.1.3 亚氨基二乙酸的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 腈水解酶 | 第18-24页 |
| 1.2.1 腈水解酶来源 | 第18页 |
| 1.2.2 腈水解酶的底物水解范围 | 第18-21页 |
| 1.2.2.1 脂肪族腈的水解 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 芳香族腈的水解 | 第20页 |
| 1.2.2.3 芳基乙腈族腈的水解 | 第20页 |
| 1.2.2.4 杂环类腈的水解 | 第20-21页 |
| 1.2.3 腈水解酶的作用机制 | 第21-22页 |
| 1.2.4 腈水解酶的酶学特性 | 第22-24页 |
| 1.2.4.1 腈水解酶的催化温度,催化体系pH,及温度,pH稳定性 | 第22-23页 |
| 1.2.4.2 金属离子及其他化学试剂对腈水解酶酶活的影响 | 第23-24页 |
| 1.2.5 腈水解酶的应用 | 第24页 |
| 1.3 细胞固定化技术及生物反应器 | 第24-27页 |
| 1.3.1 细胞固定化的方法 | 第25-26页 |
| 1.3.1.1 吸附法 | 第25页 |
| 1.3.1.2 交联法 | 第25页 |
| 1.3.1.3 包埋法 | 第25-26页 |
| 1.3.2 固定化载体 | 第26页 |
| 1.3.3 生物反应器 | 第26页 |
| 1.3.4 细胞固定化应用 | 第26-27页 |
| 1.3.4.1 利用固定化微生物细胞生产各种产物 | 第26-27页 |
| 1.3.4.2 固定化微生物细胞制造微生物传感器 | 第27页 |
| 1.4 本论文的研究内容 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-34页 |
| 第二章 腈水解酶基因工程菌的构建及表达 | 第34-48页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 材料和方法 | 第34-42页 |
| 2.2.1 菌种、质粒及培养基 | 第34-35页 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.2.1 工具酶及试剂 | 第35页 |
| 2.2.2.2 主要实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第36-41页 |
| 2.2.3.1 腈水解酶基因组的获得 | 第36页 |
| 2.2.3.2 腈水解酶基因组的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.3.3 腈水解酶基因NIT的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.2.3.4 电泳检测PCR产物 | 第38页 |
| 2.2.3.5 腈水解酶基因NIT的克隆 | 第38页 |
| 2.2.3.6 大肠杆菌E. coli JM109,E. coli BL21感受态的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.3.7 目的基因的转化 | 第39页 |
| 2.2.3.8 重组质粒的提取 | 第39页 |
| 2.2.3.9 重组表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.3.10 菌落PCR | 第40-41页 |
| 2.2.3.11 SDS-PAGE电泳分析 | 第41页 |
| 2.2.4 腈水解酶基因的诱导表达 | 第41页 |
| 2.2.5 重组腈水解酶的酶活检测,酶活定义 | 第41页 |
| 2.2.6 电泳纯腈水解酶的获得及SDS-PAGE电泳分析 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第42-46页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取及PCR扩增 | 第42页 |
| 2.3.2 腈水解酶基因的克隆 | 第42-43页 |
| 2.3.3 腈水解酶基因序列 | 第43-44页 |
| 2.3.4 菌落PCR | 第44-45页 |
| 2.3.5 腈水解酶在大肠杆菌中的表达及分离纯化 | 第45页 |
| 2.3.6 重组腈水解酶活力测定 | 第45-46页 |
| 2.4 本章小结 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第三章 产腈水解酶基因工程菌产酶条件优化 | 第48-62页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 材料和方法 | 第48-50页 |
| 3.2.1 菌种 | 第48页 |
| 3.2.2 培养基 | 第48-49页 |
| 3.2.3 主要试剂及仪器 | 第49页 |
| 3.2.4 检测方法及酶活定义 | 第49-50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-60页 |
| 3.3.1 不同种类培养基对菌体生长以及产酶的影响 | 第50页 |
| 3.3.2 有机氮源浓度的优化 | 第50-52页 |
| 3.3.3 甘油浓度的优化 | 第52页 |
| 3.3.4 起始培养基中磷酸盐浓度的优化 | 第52-53页 |
| 3.3.5 起始培养基中MgSO_4浓度的优化 | 第53-54页 |
| 3.3.6 无机氮源对菌体生长以及产酶的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.7 诱导温度的优化 | 第55-56页 |
| 3.3.8 培养基初始pH的优化 | 第56-57页 |
| 3.3.9 装液量的优化 | 第57页 |
| 3.3.10 诱导剂种类及诱导剂浓度的优化 | 第57-60页 |
| 3.3.11 优化后培养基的实验结果 | 第60页 |
| 3.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-62页 |
| 第四章 产亚氨基二乙酸腈水解酶酶学性质研究 | 第62-73页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 材料与方法 | 第62-64页 |
| 4.2.1 菌种与培养基 | 第62页 |
| 4.2.2 主要试剂及仪器 | 第62页 |
| 4.2.3 检测方法及酶活定义 | 第62-63页 |
| 4.2.4 电泳纯腈水解酶的获得 | 第63页 |
| 4.2.5 腈水解酶催化进程曲线的制作 | 第63页 |
| 4.2.6 温度对腈水解酶酶活的影响 | 第63-64页 |
| 4.2.7 pH对腈水解酶酶活的影响 | 第64页 |
| 4.2.8 金属离子、化学试剂对腈水解酶酶活的影响 | 第64页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第64-71页 |
| 4.3.1 3%、5%底物转化进程曲线的制作 | 第64-66页 |
| 4.3.2 温度对腈水解酶催化性能的影响 | 第66页 |
| 4.3.3 腈水解酶温度稳定性 | 第66-68页 |
| 4.3.4 pH对腈水解酶活力的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.5 腈水解酶的pH稳定性 | 第69-70页 |
| 4.3.6 不同金属离子、化学试剂对腈水解酶酶活的影响 | 第70-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 第五章 重组腈水解酶固定化生产亚氨基二乙酸的研究 | 第73-91页 |
| 5.1 引言 | 第73页 |
| 5.2 材料与方法 | 第73-76页 |
| 5.2.1 菌种与培养基 | 第73页 |
| 5.2.2 主要试剂及仪器 | 第73-74页 |
| 5.2.2.1 主要试剂 | 第73-74页 |
| 5.2.2.2 主要仪器 | 第74页 |
| 5.2.3 检测方法及酶活定义 | 第74页 |
| 5.2.4 不同pH缓冲体系的配制 | 第74页 |
| 5.2.5 细胞固定化方法 | 第74-76页 |
| 5.2.5.1 海藻酸钠包埋法 | 第74-75页 |
| 5.2.5.2 卡拉胶包埋法 | 第75页 |
| 5.2.5.3 琼脂包埋法 | 第75页 |
| 5.2.5.4 明胶包埋法 | 第75页 |
| 5.2.5.5 聚乙烯醇-海藻酸钠复合包埋法 | 第75页 |
| 5.2.5.6 壳聚糖-海藻酸钠复合包埋法 | 第75页 |
| 5.2.5.7 SA-CaCl_2/CMC微胶囊法 | 第75-76页 |
| 5.2.6 扫描电镜准备 | 第76页 |
| 5.2.7 底物特异性 | 第76页 |
| 5.2.8 气升式反应器的制备 | 第76页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第76-87页 |
| 5.3.1 七种不同固定化方法的比较 | 第76-79页 |
| 5.3.2 SA PVA以及CaCl_2浓度对PVA-SA固定化的影响 | 第79-80页 |
| 5.3.3 生物量对固定化的影响 | 第80-81页 |
| 5.3.4 底物特异性 | 第81-82页 |
| 5.3.5 底物浓度的选择 | 第82-83页 |
| 5.3.6 进程曲线 | 第83页 |
| 5.3.7 温度及pH对腈水解酶催化的影响 | 第83-84页 |
| 5.3.8 固定化细胞的操作稳定性 | 第84-85页 |
| 5.3.9 固定化细胞的储存稳定性 | 第85-86页 |
| 5.3.10 气升式生物反应器 | 第86-87页 |
| 5.4 本章小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 第六章 结论与展望 | 第91-93页 |
| 6.1 结论 | 第91-92页 |
| 6.2 展望 | 第92-93页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
