| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 井冈霉素的发酵生产与生物合成的遗传学研究 | 第12-18页 |
| 1.2.1 井冈霉素发酵生产研究 | 第12-16页 |
| 1.2.2 井冈霉素生物合成机制解析 | 第16-18页 |
| 1.3 糖基转移酶 | 第18-23页 |
| 1.3.1 糖基转移酶结构与分类 | 第18-20页 |
| 1.3.2 糖基转移酶的催化机制 | 第20-22页 |
| 1.3.3 井冈霉素生物合成中糖基转移酶的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 全细胞催化 | 第23-24页 |
| 1.4.1 全细胞催化简介 | 第23页 |
| 1.4.2 全细胞催化应用实例及可能存在的问题 | 第23-24页 |
| 1.5 糖基供体UDPG的生物合成与强化 | 第24-27页 |
| 1.5.1 UDPG的生物合成途径 | 第24-25页 |
| 1.5.2 UDPG的合成代谢强化 | 第25-26页 |
| 1.5.3 UDPG在井冈霉素生物合成中的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.6 本论文的研究内容和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 糖基转移酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第28-45页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第28页 |
| 2.2.2 实验培养基及溶液 | 第28-30页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.3.1 井冈霉素标准曲线的制作 | 第32页 |
| 2.3.2 酶的分离纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.3 温度对糖基转移酶酶活及稳定性的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.4 pH对糖基转移酶酶活及稳定性的影响 | 第34页 |
| 2.3.5 金属离子对糖基转移酶酶活的影响 | 第34页 |
| 2.3.6 底物与产物对糖基转移酶酶活的影响 | 第34-35页 |
| 2.3.7 酶反应动力学相关参数的测定 | 第35-36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-43页 |
| 2.4.1 井冈霉素标准曲线的制作 | 第36页 |
| 2.4.2 酶的分离纯化 | 第36-37页 |
| 2.4.3 温度对糖基转移酶酶活的影响 | 第37-38页 |
| 2.4.4 pH对糖基转移酶酶活的影响 | 第38-39页 |
| 2.4.5 金属离子对糖基转移酶酶活的影响 | 第39-40页 |
| 2.4.6 底物与产物对糖基转移酶酶活的影响 | 第40-41页 |
| 2.4.7 酶反应动力学相关参数的测定 | 第41-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-45页 |
| 第三章 全细胞催化井冈羟胺A糖基化条件优化 | 第45-56页 |
| 3.1 引言 | 第45-46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第46页 |
| 3.2.2 实验培养基及溶液 | 第46页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第46页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第46-47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.3.1 缓冲液对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第47页 |
| 3.3.2 IPTG诱导与乳糖诱导的全细胞催化井冈羟胺A糖基化行为差异性研究 | 第47-48页 |
| 3.3.3 其他糖作为辅助底物对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第48页 |
| 3.3.4 菌体浓度对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第48页 |
| 3.3.5 底物投料时间对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第48页 |
| 3.3.6 金属离子与表面活性剂对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第48-49页 |
| 3.3.7 底物浓度对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第49页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第49-55页 |
| 3.4.1 缓冲液对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第49-50页 |
| 3.4.2 IPTG诱导与乳糖诱导的全细胞催化井冈羟胺A糖基化行为差异性研究 | 第50-51页 |
| 3.4.3 其他糖作为辅助底物对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第51-52页 |
| 3.4.4 菌体浓度对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第52-53页 |
| 3.4.5 底物投料时间对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第53页 |
| 3.4.6 金属离子与表面活性剂对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第53-54页 |
| 3.4.7 底物浓度对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响研究 | 第54-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 糖基供体UDPG合成代谢强化的初步研究 | 第56-68页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-58页 |
| 4.2.1 实验菌株及载体 | 第56-57页 |
| 4.2.2 实验培养基和溶液 | 第57页 |
| 4.2.3 实验主要试剂 | 第57-58页 |
| 4.2.4 实验主要仪器 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-63页 |
| 4.3.1 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因的TA克隆及验证 | 第58-60页 |
| 4.3.2 糖基转移酶、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因共表达载体的构建及验证 | 第60-61页 |
| 4.3.3 糖基转移酶、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因共表达蛋白水平验证及酶活验证 | 第61-62页 |
| 4.3.4 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶超量表达对UDPG合成量的影响 | 第62页 |
| 4.3.5 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶超量表达对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响 | 第62-63页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第63-67页 |
| 4.4.1 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因的TA克隆及验证 | 第63-64页 |
| 4.4.2 糖基转移酶、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因共表达载体的构建及验证 | 第64-65页 |
| 4.4.3 糖基转移酶、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因共表达蛋白水平验证及酶活验证 | 第65页 |
| 4.4.4 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶超量表达对UDPG合成量的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.5 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶超量表达对全细胞催化井冈羟胺A糖基化的影响 | 第66-67页 |
| 4.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 总结和展望 | 第68-70页 |
| 5.1 本论文的主要结论 | 第68-69页 |
| 5.2 展望 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第77页 |
