| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 玉米矮花叶病的发生和危害 | 第11-12页 |
| 1.2 玉米矮花叶病的研究现状 | 第12-17页 |
| 1.2.1 我国玉米矮花叶病的病原及病毒形态结构 | 第12-13页 |
| 1.2.2 玉米矮花叶病毒的寄主 | 第13页 |
| 1.2.3 玉米矮花叶病毒的传播 | 第13-14页 |
| 1.2.4 玉米矮花叶病的主要症状 | 第14-15页 |
| 1.2.5 玉米抗矮花叶病种质资源鉴定 | 第15-16页 |
| 1.2.6 玉米矮花叶病的抗性遗传研究 | 第16-17页 |
| 1.3 植物病毒病的抗病策略 | 第17-21页 |
| 1.3.1 利用病毒外壳蛋白介导的抗性 | 第17-18页 |
| 1.3.2 利用复制酶介导的抗性 | 第18页 |
| 1.3.3 利用运动蛋白介导的抗性 | 第18页 |
| 1.3.4 利用RNA干扰介导的抗性 | 第18-20页 |
| 1.3.5 RNA干扰在抗病毒基因工程中的优势 | 第20-21页 |
| 1.4 玉米遗传转化的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.4.1 玉米遗传转化方法和受体材料的选择 | 第21-22页 |
| 1.4.2 玉米遗传转化的选择标记 | 第22页 |
| 1.4.3 影响农杆菌介导转化的因素 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 RNA干扰抗矮花叶病载体的构建 | 第25-37页 |
| 1 材料与方法 | 第25-32页 |
| 1.1 试验材料 | 第25页 |
| 1.2 生化试剂 | 第25页 |
| 1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 1.4 试验方法 | 第25-32页 |
| 1.4.1 RNA干扰目的基因的选择与克隆 | 第26页 |
| 1.4.2 正向目的片段插入中间载体 | 第26-29页 |
| 1.4.3 反向目的片段插入含正向片段的中间载体 | 第29页 |
| 1.4.4 表达载体PNCXB-846的构建 | 第29-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-34页 |
| 2.1 目的基因的选择与克隆 | 第32页 |
| 2.2 正向目的片段的插入结果 | 第32页 |
| 2.3 反向目的片段的插入结果 | 第32-33页 |
| 2.4 表达载体PNCXB-846的构建 | 第33-34页 |
| 3 结论与讨论 | 第34-37页 |
| 3.1 RNA干扰片段的选择与获得 | 第34页 |
| 3.2 RNA干扰载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.3 标记基因的选择 | 第35页 |
| 3.4 应用Cre/loxp系统高效删除转基因玉米的标记基因 | 第35-37页 |
| 第三章 RNA干扰基因的农杆菌介导玉米转化 | 第37-55页 |
| 1 材料与方法 | 第37-39页 |
| 1.1 试验材料 | 第37页 |
| 1.2 菌株 | 第37页 |
| 1.3 生化试剂 | 第37-38页 |
| 1.4 仪器 | 第38页 |
| 1.5 培养基和试剂的配制 | 第38-39页 |
| 2 试验方法 | 第39-42页 |
| 2.1 干扰基因导入农杆菌 | 第39-40页 |
| 2.1.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 2.1.2 重组质粒PNCXB-846的转化 | 第39页 |
| 2.1.3 阳性克隆的鉴定和保存 | 第39-40页 |
| 2.2 农杆菌介导法转化玉米幼胚 | 第40-41页 |
| 2.2.1 幼胚准备 | 第40页 |
| 2.2.2 农杆菌浸染液的准备 | 第40页 |
| 2.2.3 农杆菌侵染幼胚 | 第40页 |
| 2.2.4 幼胚和农杆菌的共培养 | 第40页 |
| 2.2.5 静息培养 | 第40页 |
| 2.2.6 选择培养 | 第40-41页 |
| 2.2.7 植株的再生 | 第41页 |
| 2.2.8 再生植株的环境适应 | 第41页 |
| 2.2.9 再生植株的管理 | 第41页 |
| 2.3 农杆菌介导法转化玉米愈伤组织 | 第41-42页 |
| 2.3.1 愈伤组织的诱导 | 第41页 |
| 2.3.2 农杆菌浸染液的准备 | 第41页 |
| 2.3.3 不同继代次数愈伤组织的侵染 | 第41页 |
| 2.3.4 不同预培养天数愈伤组织的侵染 | 第41页 |
| 2.3.5 不同浓度的农杆菌侵染 | 第41-42页 |
| 2.3.6 乙酰丁香酮(AS)的处理 | 第42页 |
| 2.4 数据处理 | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-52页 |
| 3.1 RNA干扰载体导入农杆菌 | 第42页 |
| 3.2 农杆菌介导转化玉米幼胚转基因植株的获得 | 第42-52页 |
| 3.2.1 幼胚诱导成的抗性愈伤组织获得 | 第42-46页 |
| 3.2.2 幼胚诱导成抗性愈伤再生植株的获得 | 第46-47页 |
| 3.2.3 再生植株的室内和大田生长结实 | 第47-48页 |
| 3.2.4 不同继代次数对愈伤组织抗性愈伤率的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.5 预培养天数对抗性愈伤转化率的影响 | 第49页 |
| 3.2.6 农杆菌浓度对抗性愈伤转化率的影响 | 第49-50页 |
| 3.2.7 AS浓度对抗性愈伤率的影响 | 第50页 |
| 3.2.8 抗性愈伤组织的获得 | 第50-51页 |
| 3.2.9 抗性愈伤组织分化出再生植株及bar基因试纸条检测 | 第51-52页 |
| 4 结论与讨论 | 第52-55页 |
| 4.1 农杆菌介导玉米幼胚影响因素的分析 | 第52-53页 |
| 4.2 农杆菌介导玉米愈伤组织影响因素的分析 | 第53-54页 |
| 4.3 遗传转化过程中抗性愈伤和再生植株的一致性 | 第54页 |
| 4.4 幼胚和愈伤组织分别作为转化受体的分析 | 第54-55页 |
| 第四章 抗矮花叶病RNAi转基因玉米抗性效果鉴定 | 第55-74页 |
| 1 材料和方法 | 第55-60页 |
| 1.1 材料和试验设计 | 第55页 |
| 1.2 抗矮花叶病转基因植株鉴定方法 | 第55-56页 |
| 1.3 转基因植株标记基因和目的基因的检测 | 第56-58页 |
| 1.4 T_1、T_2、T_3代转基因材料的除草剂(PPT)筛选 | 第58页 |
| 1.5 T_3代转基因植株Southern鉴定 | 第58-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-71页 |
| 2.1 T_1代植株标记基因的PCR检测结果 | 第60页 |
| 2.2 T_1代转基因植株的表型抗性筛选结果 | 第60-61页 |
| 2.2.1 草丁膦(PPT)对T1代转基因材料致死浓度的确定 | 第60-61页 |
| 2.2.2 T_1代植株的草丁膦(PPT)表型抗性筛选结果 | 第61页 |
| 2.3 T_1代植株目的基因的PCR检测结果 | 第61页 |
| 2.4 T_1代植株接种鉴定结果 | 第61页 |
| 2.5 T_2代植株标记基因PCR、抗PPT筛选、目的基因PCR | 第61-63页 |
| 2.6 T_2代转基因穗行的抗病性鉴定结果 | 第63-65页 |
| 2.7 T_3代植株标记基因PCR、抗PPT筛选、目的基因PCR | 第65-67页 |
| 2.8 T_3代转基因株系的抗病性鉴定结果 | 第67-69页 |
| 2.9 转基因植株不同鉴定方法比较 | 第69页 |
| 2.10 外源基因在转基因植株T_1、T_2、T_3代的遗传 | 第69-70页 |
| 2.11 T_3代转基因植株的Southern杂交 | 第70-71页 |
| 3 结论与讨论 | 第71-74页 |
| 3.1 转基因植株的除草剂筛选浓度分析 | 第71页 |
| 3.2 Southern杂交技术 | 第71-72页 |
| 3.3 转基因植株不同鉴定方法分析 | 第72-73页 |
| 3.4 外源基因在转基因植株早代的遗传分析 | 第73页 |
| 3.5 转基因阳性植株的抗病性分析 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| ABSTRACT | 第82-83页 |
