摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
缩略词表 | 第13-14页 |
克隆基因列表 | 第14-15页 |
第一章 绪论 | 第15-39页 |
1.1 果实的种类及生长发育概述 | 第15-17页 |
1.2 控制果实形状相关基因的研究 | 第17-30页 |
1.2.1 控制果实长度的基因 | 第18-20页 |
1.2.2 控制果实宽度的基因 | 第20-23页 |
1.2.3 控制果实性状的YABBY基因家族 | 第23-24页 |
1.2.4 控制果实性状的其他基因 | 第24-29页 |
1.2.5 调控果实性状基因间的协调关系 | 第29-30页 |
1.3 研究果实形状的相关技术 | 第30-36页 |
1.3.1 获得植物突变体 | 第30-32页 |
1.3.2 农杆菌介导的转基因技术 | 第32-34页 |
1.3.3 茄子是重要的蔬菜作物 | 第34-36页 |
1.4 研究的内容、技术路线 | 第36-39页 |
1.4.1 本项目的思路和主要研究内容 | 第36-37页 |
1.4.2 研究技术路线图 | 第37-38页 |
1.4.3 本项研究的目的及意义 | 第38-39页 |
第二章 番茄YABBY家族基因的克隆与功能研究 | 第39-59页 |
2.1 材料与方法 | 第39-46页 |
2.1.1 材料 | 第39-40页 |
2.1.2 番茄RNA提取及cDNA的合成 | 第40-42页 |
2.1.3 普通PCR扩增 | 第42页 |
2.1.4 大肠杆菌JM109感受态制备和转化 | 第42-43页 |
2.1.5 其他常规实验 | 第43页 |
2.1.6 不同物种中YABBY家族成员的扫描 | 第43页 |
2.1.7 番茄YABBY家族成员的克隆 | 第43-45页 |
2.1.8 YABBY家族基因的生物信息学分析 | 第45页 |
2.1.9 进化树分析 | 第45页 |
2.1.10 大小果型番茄表达对比分析 | 第45-46页 |
2.1.11 测序Heinz番茄RNA-seq分析 | 第46页 |
2.2 结果与分析 | 第46-57页 |
2.2.1 YABBY家族基因在不同物种中的分布 | 第46-48页 |
2.2.2 番茄9个番茄YABBY基因序列分析 | 第48-49页 |
2.2.3 比较分析基因序列、基因结构及YABBY结构域 | 第49-51页 |
2.2.4 YABBY家族基因的进化 | 第51-53页 |
2.2.5 YABBY基因表达与果型的关系 | 第53-55页 |
2.2.6 测序Heinz番茄RNA-seq表达差异 | 第55-57页 |
2.3 讨论 | 第57-59页 |
2.3.1 不同物种YABBY家族基因数目的差异性分析 | 第57页 |
2.3.2 番茄9个YABBY家族基因的序列和结构域是保守的 | 第57-58页 |
2.3.3 YABBY基因的序列和功能在模式植物间进化 | 第58页 |
2.3.4 YABBY基因的表达与番茄果型性状控制的关系 | 第58-59页 |
第三章 茄子YABBY家族的克隆和功能分析 | 第59-91页 |
3.1 材料与方法 | 第59-68页 |
3.1.1 材料 | 第59-60页 |
3.1.2 基因组DNA的提取 | 第60页 |
3.1.3 农杆菌GV3101感受态制备与冻融转化 | 第60-61页 |
3.1.4 常规试验方法 | 第61页 |
3.1.5 同源克隆茄子YABBY基因 | 第61-62页 |
3.1.6 茄子不同果型及种间YABBY家族成员的序列比较 | 第62页 |
3.1.7 YABBY家族基因结构的比较 | 第62-63页 |
3.1.8 载体构建及亚细胞定位 | 第63-65页 |
3.1.9 YABBY家族基因在不同组织表达分析 | 第65页 |
3.1.10 YABBY家族进化分析 | 第65-66页 |
3.1.11 病毒诱导基因沉默 | 第66-68页 |
3.2 结果与分析 | 第68-88页 |
3.2.1 克隆获得茄子5个YABBY基因 | 第68-72页 |
3.2.2 不同果型(种内)及远缘种(种间)序列分析 | 第72-73页 |
3.2.3 茄子YABBY家族的基因结构比较 | 第73-76页 |
3.2.4 YABBY家族一致的亚细胞定位 | 第76-79页 |
3.2.5 YABBY家族成员表达模式 | 第79页 |
3.2.6 YABBY家族5个分支的进化模式 | 第79-84页 |
3.2.7 YABBY家族成员病毒诱导基因沉默后的果型变化 | 第84-88页 |
3.3 讨论 | 第88-91页 |
3.3.1 茄子YABBY家族成员进化复杂 | 第88页 |
3.3.2 茄子YABBY家族成员SNPs和InDels存在种间差异性 | 第88-89页 |
3.3.3 茄子YABBY家族成员与番茄序列的结构差异 | 第89页 |
3.3.4 较为一致的亚细胞定位推测YABBY家族作为转录因子的可能性 | 第89页 |
3.3.5 茄子YABBY家族基因的进化模式保守 | 第89-90页 |
3.3.6 YAB2和CRC基因是控制茄子果型的重要的YABBY家族成员 | 第90-91页 |
第四章 控制茄子果实长度SMOVATE基因的克隆及功能分析 | 第91-115页 |
4.1 材料与方法 | 第91-97页 |
4.1.1 材料 | 第91-92页 |
4.1.2 常规实验方法 | 第92页 |
4.1.3 PCR扩增酶的选择 | 第92页 |
4.1.4 电子克隆Ovate基因 | 第92-93页 |
4.1.5 RACE克隆SmOvate基因 | 第93页 |
4.1.6 基因序列和结构比较 | 第93-94页 |
4.1.7 Ovate基因表达分析 | 第94页 |
4.1.8 热不平衡PCR扩增启动子区域 | 第94-95页 |
4.1.9 载体的构建和亚细胞定位 | 第95页 |
4.1.10 酵母双杂交进行SmOvate蛋白和同源克隆的SmKnox蛋白互作分析 | 第95-96页 |
4.1.11 Ovate基因在不同物种中的进化分析 | 第96-97页 |
4.2 结果与分析 | 第97-112页 |
4.2.1 电子克隆SmOvate基因 | 第97页 |
4.2.2 RACE克隆SmOvate基因cDNA全长 | 第97-100页 |
4.2.3 基因序列、结构比较分析 | 第100-102页 |
4.2.4 SmOvate基因表达量与茄子果型指数呈现负相关性 | 第102-103页 |
4.2.5 SmOvate基因启动子区域的序列分析 | 第103-105页 |
4.2.6 SmOvate蛋白在本氏烟草的细胞核定位 | 第105-106页 |
4.2.7 SmOvate和SmKnox蛋白互作 | 第106-108页 |
4.2.8 SmOvate基因组大小和基因数目在物种进化中的分异 | 第108-112页 |
4.3 讨论 | 第112-115页 |
4.3.1 茄子种间、种内SmOvate基因序列和结构水平的变化 | 第112页 |
4.3.2 SmOvate基因的表达负调控茄子不同果型品种的果实长度 | 第112-113页 |
4.3.3 圆形和长形茄子品种间SmOvate基因的启动子序列无差异 | 第113页 |
4.3.4 SmOvate蛋白与SmKnox蛋白互作调控赤霉素合成关键基因的表达 | 第113-114页 |
4.3.5 SmOvate基因表达量的差异决定了茄子果实的长度形状 | 第114-115页 |
第五章 控制茄子果实心室数SMWOX13基因的克隆、亚细胞定位及序列分析 | 第115-124页 |
5.1 材料与方法 | 第115-117页 |
5.1.1 植物材料 | 第115页 |
5.1.2 常规实验 | 第115页 |
5.1.3 SmWOX13基因的克隆 | 第115-116页 |
5.1.4 基因的结构和蛋白 3D结构 | 第116页 |
5.1.5 载体构建及亚细胞定位 | 第116-117页 |
5.1.6 相关基因调控网络 | 第117页 |
5.1.7 系统发生树的构建 | 第117页 |
5.2 结果与分析 | 第117-122页 |
5.2.1 SmWOX13的基因分离 | 第117-119页 |
5.2.2 SmWOX13基因结构和蛋白 3D结构 | 第119-120页 |
5.2.3 SmWOX13基因的亚细胞定位 | 第120-121页 |
5.2.4 SmWOX13基因共表达网络的构建 | 第121页 |
5.2.5 SmWOX13基因分子发育树的构建 | 第121-122页 |
5.3 讨论 | 第122-124页 |
第六章 结论与展望 | 第124-127页 |
6.1 主要研究结论 | 第124-125页 |
6.2 主要创新点 | 第125-126页 |
6.3 研究工作展望 | 第126-127页 |
参考文献 | 第127-138页 |
附录 | 第138-169页 |
攻读博士学位期间已(将)发表论文和专利申请 | 第169-170页 |
致谢 | 第170页 |