| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一部分: 酪氨酰-tRNA合成酶突变体的结构生物学研究 | 第16-55页 |
| 第一章 X-射线晶体学解析蛋白质结构 | 第16-27页 |
| 1.1 X-射线蛋白质晶体学概述 | 第16-19页 |
| 1.2 蛋白质晶体的获得 | 第19-21页 |
| 1.2.1 高纯度高均一性蛋白的获得 | 第19-20页 |
| 1.2.2 蛋白质结晶方法 | 第20-21页 |
| 1.3 蛋白质晶体的筛选与优化 | 第21-22页 |
| 1.4 蛋白质晶体数据的收集与处理 | 第22-24页 |
| 1.5 模型的搭建与结构的修正 | 第24-27页 |
| 第二章 酪氨酰-tRNA合成酶突变体的结构生物学研究 | 第27-55页 |
| 2.1 背景介绍 | 第27-32页 |
| 2.1.1 酪氨酸酚裂解酶(TPL)转化合成3,5-二氟-L-酪氨酸 | 第27-29页 |
| 2.1.1.1 酪氨酸酚裂解酶的发现 | 第27-28页 |
| 2.1.1.2 酪氨酸酚裂解酶的作用机理 | 第28-29页 |
| 2.1.1.3 酪氨酸酚裂解酶的应用 | 第29页 |
| 2.1.2 用~(19)F核磁共振研究蛋白质动态构象变化 | 第29-30页 |
| 2.1.3 突变合成酶的结构研究 | 第30-32页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第32-37页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.2.2.1 TPL的表达纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.2.2 SDS-PAGE检测TPL | 第34-36页 |
| 2.2.2.3 TPL酶催化反应 | 第36页 |
| 2.2.2.4 转化产物的分离纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.2.5 3,5-二氟-L-酪氨酸化学结构的鉴定 | 第37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-54页 |
| 2.3.1. 酪氨酸酚裂解酶转化合成3,5-二氟-L-酪氨酸 | 第37-42页 |
| 2.3.2 编码3,5-二氟-L-酪氨酸的氨酰-tRNA合成酶的筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.3 F2YRS蛋白的表达与纯化 | 第43-44页 |
| 2.2.4 复合物晶体的获得与结构解析 | 第44-48页 |
| 2.2.5 ~(19)F核磁共振研究蛋白质动态构象 | 第48-54页 |
| 2.4 本章总结 | 第54-55页 |
| 第二部分: 基因编码非天然氨基酸设计荧光蛋白 | 第55-102页 |
| 第一章 扩展遗产密码子技术的介绍 | 第55-61页 |
| 1.1 背景介绍 | 第55-61页 |
| 1.1.1 正交的tRNA密码子对 | 第56-60页 |
| 1.1.2 扩展遗传密码子技术的展望 | 第60-61页 |
| 第二章 荧光蛋白概述 | 第61-67页 |
| 2.1 绿色荧光蛋白的发现 | 第61-62页 |
| 2.2 荧光蛋白的基本原理 | 第62-64页 |
| 2.3 荧光蛋白的应用 | 第64-65页 |
| 2.4 荧光蛋白和UAA | 第65-67页 |
| 第三章 基因编码非天然氨基酸探究生物电子转移 | 第67-79页 |
| 3.1 电子转移概况背景介绍 | 第67-68页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第68-72页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第68页 |
| 3.2.2 试验方法 | 第68-72页 |
| 3.2.2.1 常用试剂配制和使用方法 | 第68-69页 |
| 3.2.2.2 3-吡唑基酪氨酸(pyTyr)的合成和鉴定 | 第69-70页 |
| 3.2.2.3 3-吡唑基酪氨酸(pyTyr)插入系统的构建 | 第70页 |
| 3.2.2.4 GFP-Tyr151pyTyr的结构生物学 | 第70-72页 |
| 3.3 实验结果 | 第72-78页 |
| 3.3.1 3-吡唑基酪氨酸插入GFP151的质谱鉴定 | 第72-73页 |
| 3.3.2 GFP-151pyTyrCu复合物晶体结构的获得与结构解析 | 第73-76页 |
| 3.3.3 实验结果综合分析 | 第76-78页 |
| 3.3.3.1 GFP不同位置插入pyTyr电子传递的速率 | 第76-78页 |
| 3.4 本章总结 | 第78-79页 |
| 第四章 HqAla拓展荧光蛋白发色团 | 第79-92页 |
| 4.1 研究背景 | 第79页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第79-84页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第79-84页 |
| 4.2.1.1 8-羟基喹啉丙氨酸(HqAla)的转化合成 | 第79-81页 |
| 4.2.1.2 8-羟基喹啉丙氨酸(HqAla)插入系统的构建 | 第81页 |
| 4.2.1.3 sfGFP-66-HqAla的结构生物学 | 第81-84页 |
| 4.3 实验结果 | 第84-91页 |
| 4.3.1 HqAla插入sfGFP66TAG的质谱鉴定 | 第84-86页 |
| 4.3.2 sfGFP-66-HqAla晶体结构的获得与结构解析 | 第86-88页 |
| 4.3.3 实验结果综合分析 | 第88-91页 |
| 4.4 本章总结 | 第91-92页 |
| 第五章 其它编码非天然氨基酸的蛋白质结构解析及分析 | 第92-102页 |
| 5.1 PsmOrange的结构生物学研究 | 第92-95页 |
| 5.1.1 PsmOrange的表达纯化和晶体筛选 | 第92-93页 |
| 5.1.2 PsmOrange的结构解析 | 第93-95页 |
| 5.2 iLOV蛋白pka的表征 | 第95-102页 |
| 5.2.1 背景简介 | 第95页 |
| 5.2.2 iLov486C12Y蛋白晶体结构的获得与结构解析 | 第95-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第111页 |
