| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1. 内源性反转录病毒 | 第11-12页 |
| 1.1 ERV及其分类 | 第11页 |
| 1.2 ERV的功能 | 第11-12页 |
| 2. 先天免疫及其与ERV的关系 | 第12-13页 |
| 2.1 先天性免疫及其组成 | 第12页 |
| 2.2 先天免疫的抗病毒作用及机制 | 第12页 |
| 2.3 ERV与先天免疫的关系 | 第12-13页 |
| 3. ERV的表遗传调控 | 第13-17页 |
| 3.1 DNA甲基化的作用及其调控 | 第13-15页 |
| 3.2 microRNA及其作用机制 | 第15页 |
| 3.3 营养因子与DNA甲基化 | 第15-16页 |
| 3.4 ERV的表观遗传调控研究进展 | 第16-17页 |
| 4. 本研究的目的、意义和主要内容 | 第17-18页 |
| 第二章 禽内源性反转录病毒ALVE1基因序列的测定及其表达规律研究 | 第18-27页 |
| 1. 材料与方法 | 第18-19页 |
| 1.1 试验材料 | 第18页 |
| 1.2 仪器和试剂 | 第18-19页 |
| 2. 试验方法 | 第19-23页 |
| 2.1 鸡胚成纤维细胞的制备 | 第19页 |
| 2.2 实验样品采集 | 第19页 |
| 2.3 引物的设计与合成 | 第19-20页 |
| 2.4 细胞RNA提取 | 第20-21页 |
| 2.5 SPF白来航鸡组织RNA提取 | 第21页 |
| 2.6 cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 2.7 基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.8 常规RT-PCR和RT-qPCR扩增反应 | 第23页 |
| 3. 结果与分析 | 第23-26页 |
| 3.1 禽内源性反转录病毒ALVE1基因序列分析 | 第23-24页 |
| 3.2 禽内源性反转录病毒ALVE1基因转录表达水平分析 | 第24-25页 |
| 3.3 ALVE1 Env(gp85)基因在不同生长期SPF白羽鸡各组织中的表达规律 | 第25-26页 |
| 4. 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 营养因子对ALVE1表达的影响研究 | 第27-33页 |
| 1. 仪器和试剂 | 第28页 |
| 1.1 主要试剂 | 第28页 |
| 1.2 主要试剂的配制 | 第28页 |
| 1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2. 试验方法 | 第28-30页 |
| 2.1 细胞计数与铺板 | 第28页 |
| 2.2 蛋氨酸及维生素C处理细胞 | 第28-29页 |
| 2.3 RNA提取 | 第29页 |
| 2.4 cDNA合成 | 第29页 |
| 2.5 RT-QPCR扩增反应体系及条件 | 第29页 |
| 2.6 引物设计与合成 | 第29-30页 |
| 2.7 统计分析和作图 | 第30页 |
| 3. 结果与分析 | 第30-32页 |
| 3.1 蛋氨酸处理对ALVE1 LTR基因和先天免疫相关基因表达的影响 | 第30-31页 |
| 3.2 维生素C处理对ALVE1转录表达的影响 | 第31-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 禽内源性反转录病毒ALVE的表达调控及其与免疫的关系研究 | 第33-50页 |
| 1. 仪器和试剂 | 第33-34页 |
| 1.1 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 2. 试验方法 | 第34-40页 |
| 2.1 HD11细胞去甲基化处理 | 第34页 |
| 2.2 细胞基因组抽提 | 第34-35页 |
| 2.3 重亚硫酸盐处理HD11细胞基因组 | 第35-36页 |
| 2.4 引物设计与合成 | 第36-37页 |
| 2.5 焦磷酸测序反应体系 | 第37页 |
| 2.6 Overlap PCR突变 | 第37页 |
| 2.7 重组质粒构建 | 第37-38页 |
| 2.8 ALVE1 env过表达载体构建 | 第38页 |
| 2.9 载体及PCR产物酶切 | 第38页 |
| 2.10 酶切产物胶回收 | 第38页 |
| 2.11 质粒转化 | 第38页 |
| 2.12 质粒抽提 | 第38-39页 |
| 2.13 细胞转染 | 第39页 |
| 2.14 荧光素酶Luciferase检测 | 第39页 |
| 2.15 统计分析和作图 | 第39-40页 |
| 3. 结果与分析 | 第40-48页 |
| 3.1 ALVE1甲基化岛的预测 | 第40页 |
| 3.2 AZA处理对ALVE甲基化水平的影响 | 第40-43页 |
| 3.3 AZA处理对ALVE1 mRNA表达的影响 | 第43-44页 |
| 3.4 AZA处理对先天免疫相关基因表达的影响 | 第44页 |
| 3.5 ALVE1 env转录物及gga-miR-155前体序列扩增 | 第44-45页 |
| 3.6 ALVE1 env转录物野生型、突变型以及gga-miR-155重组质粒构建 | 第45页 |
| 3.7 重组质粒序列鉴定 | 第45-46页 |
| 3.8 miR-155直接靶向env序列 | 第46-47页 |
| 3.9 ALVE1 env基因过表达 | 第47-48页 |
| 4. 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间发表学术论文目录 | 第59-60页 |
