| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 TRAPα的研究进展 | 第14-21页 |
| 1 引言 | 第14页 |
| 2 TRAP 以及其亚基的研究状况 | 第14-17页 |
| ·TRAP 的相关研究 | 第14-15页 |
| ·TRAP 亚基的发现 | 第15-16页 |
| ·TRAP 结构与生物学功能 | 第16-17页 |
| 3 TRAPα的研究 | 第17-19页 |
| ·TRAPα的结构 | 第17-18页 |
| ·TRAPα的功能 | 第18页 |
| ·TRAPα与疾病 | 第18-19页 |
| 4 TRAPα的研究现状及展望 | 第19-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的和意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程 | 第22-23页 |
| ·BmTRAPα基因克隆表达、表达产物抗血清的制备和BmTRAPα蛋白的细胞定位 | 第22页 |
| ·BmTRAPα基因在家蚕体内转录与表达的分析 | 第22-23页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第23-31页 |
| 1 生物信息学工具 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23页 |
| 3 分析结果 | 第23-30页 |
| ·BmTRAPα基因序列 | 第23-25页 |
| ·保守结构域的预测 | 第25页 |
| ·二级结构的预测 | 第25页 |
| ·疏水性预测 | 第25-26页 |
| ·信号肽预测 | 第26-27页 |
| ·跨膜区预测 | 第27-28页 |
| ·同源性分析 | 第28-29页 |
| ·进化树分析 | 第29页 |
| ·BmTRAPα蛋白定位的预测 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-31页 |
| 第四章 原核表达纯化与抗体制备 | 第31-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第31-35页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32-35页 |
| ·处理包涵体的试剂 | 第32页 |
| ·尿素镍柱亲和层析纯化试剂 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE 用试剂 | 第32-33页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第33页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第33-34页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第34页 |
| ·免疫检测用试剂 | 第34-35页 |
| ·Western blot 检测用试剂 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-43页 |
| ·BmTRAPα基因的克隆 | 第35-39页 |
| ·质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·PCR 获得完整的ORF 序列 | 第36-37页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a 的双酶切 | 第37页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37-38页 |
| ·E.coli TG1、BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·包涵体的溶解 | 第40页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化融合蛋白 | 第40页 |
| ·抗体的制备 | 第40-41页 |
| ·抗原的制备 | 第40-41页 |
| ·免疫动物 | 第41页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第41页 |
| ·抗体的效价测定 | 第41-42页 |
| ·Western blot 检测 | 第42-43页 |
| ·抗体的纯化 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| ·扩增完整的ORF 序列 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pET-28a-BmTRAPα的鉴定 | 第44页 |
| ·BmTRAPα基因的克隆与原核表达 | 第44-45页 |
| ·BmTRAPα的纯化 | 第45-46页 |
| ·抗体的效价测定 | 第46页 |
| ·Western blot 检测 | 第46-47页 |
| ·抗体的纯化 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 BmTRAPα在家蚕发育各时期及组织的分布 | 第50-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第50-51页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·订购试剂 | 第50页 |
| ·试剂的配制 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-52页 |
| ·家蚕不同发育时期及五龄幼虫不同组织总蛋白的提取 | 第51页 |
| ·Western blot 检测BmTRAPα蛋白在家蚕卵、幼虫、蛹和蛾四个不同时期和五龄幼虫不同组织中的分布 | 第51-52页 |
| ·ELISA 半定量检测BmTRAPα在各时期和五龄期各组织中的含量 | 第52页 |
| ·工作曲线 | 第52页 |
| ·ELISA 检测含量 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-55页 |
| ·Western blot 检测家蚕发育各时期BmTRAPα的表达量变化 | 第52页 |
| ·Western blot 检测五龄幼虫各组织中BmTRAPα表达量的变化 | 第52-53页 |
| ·工作曲线的制作 | 第53-54页 |
| ·ELISA 半定量测定家蚕各时期中BmTRAPα含量 | 第54页 |
| ·ELISA 半定量测定五龄幼虫各组织中BmTRAPα含量 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第六章 荧光定量PCR | 第57-65页 |
| 1 材料与试剂 | 第57页 |
| ·提取各时期及组织样品 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| ·引物设计 | 第57页 |
| ·提取总RNA | 第57-58页 |
| ·RNA 逆转录 | 第58-59页 |
| ·反应程序 | 第59页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-63页 |
| ·家蚕发育过程中mRNA 量的变化 | 第60-61页 |
| ·五龄幼虫各组织中mRNA 量的变化 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 第七章 免疫细胞化学 | 第65-69页 |
| 1 材料与试剂 | 第65页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·试剂的配制 | 第65页 |
| 2 方法 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 结论与创新点 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
