| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 中英文缩略语表 | 第10-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-39页 |
| 1.1 Cry 蛋白简介 | 第17-18页 |
| 1.2 Cry 蛋白的结构与功能 | 第18-22页 |
| 1.2.1 Domain I | 第20页 |
| 1.2.2 Domain II | 第20-21页 |
| 1.2.3 Domain III | 第21-22页 |
| 1.3 Cry 蛋白在鳞翅目害虫中的作用机制 | 第22-28页 |
| 1.3.1 受体的结合 | 第24-25页 |
| 1.3.2 前孔洞的形成 | 第25-26页 |
| 1.3.3 毒素插入细胞膜 | 第26-28页 |
| 1.4 鳞翅目昆虫对 Bt 蛋白产生抗性机制 | 第28-32页 |
| 1.4.1 钙粘蛋白和类钙粘蛋白（CAD）的突变 | 第30-31页 |
| 1.4.2 APN 的突变 | 第31页 |
| 1.4.3 ALP 的突变 | 第31页 |
| 1.4.4 ABCC2 的突变 | 第31-32页 |
| 1.5 解决或延缓害虫抗性产生的方法 | 第32-34页 |
| 1.6 Cry 蛋白的结合分析 | 第34-36页 |
| 1.6.1 常见的结合分析方法 | 第34-35页 |
| 1.6.2 欧洲玉米螟的结合分析 | 第35-36页 |
| 1.7 cry1I 基因及其蛋白 | 第36-37页 |
| 1.8 本研究的目的和意义与立题依据 | 第37-39页 |
| 第二章 cry1Ie2 基因的表达、纯化及生物活性测定 | 第39-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第39-40页 |
| 2.1.2 试剂 | 第40页 |
| 2.1.3 供试昆虫 | 第40页 |
| 2.1.4 人工饲料 | 第40-41页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 2.2.1 标准菌株 T03B001 晶体形态学观察 | 第41-42页 |
| 2.2.2 T03B001 菌株基因组 DNA 序列的获取 | 第42页 |
| 2.2.3 序列分析 | 第42页 |
| 2.2.4 cry1Ie2 基因的表达及蛋白提取 | 第42-43页 |
| 2.2.5 Cry1Ie2 蛋白 SDS-PAGE 检测 | 第43页 |
| 2.2.6 亲和层析纯化 Cry1Ie2 蛋白 | 第43页 |
| 2.2.7 透析 | 第43页 |
| 2.2.8 Cry1Ie2 蛋白的活化 | 第43-44页 |
| 2.2.9 离子交换纯化 Cry1Ie2 蛋白 | 第44页 |
| 2.2.10 其它 Cry 蛋白的纯化 | 第44页 |
| 2.2.11 生物活性测定 | 第44-45页 |
| 2.3 结果 | 第45-54页 |
| 2.3.1 晶体形态观察 | 第45页 |
| 2.3.2 T03B001 菌株中基因类型 | 第45-46页 |
| 2.3.3 Cry1Ie2 蛋白的序列分析 | 第46-47页 |
| 2.3.4 cry1Ie2 基因在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| 2.3.5 亲和层析纯化 Cry1Ie2 蛋白 | 第48-49页 |
| 2.3.6 Cry1Ie2 蛋白的活化 | 第49-50页 |
| 2.3.7 离子交换纯化 Cry1Ie2 蛋白 | 第50-51页 |
| 2.3.8 亚洲玉米螟，亚洲棉铃虫，甜菜夜蛾生物活性测定 | 第51-52页 |
| 2.3.9 欧洲玉米螟生物活性测定 | 第52-53页 |
| 2.3.10 秋粘虫，烟蚜夜蛾，美洲棉铃虫生物活性测定 | 第53-54页 |
| 2.3.11 黄粉虫生物活性测定 | 第54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-57页 |
| 第三章 Cry 蛋白与欧洲玉米螟 BBMV 结合分析 | 第57-73页 |
| 3.1 材料 | 第57-59页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第57页 |
| 3.1.2 常用试剂及材料 | 第57-59页 |
| 3.1.3 常用溶液与缓冲液 | 第59页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第59页 |
| 3.2 方法 | 第59-63页 |
| 3.2.1 中肠及 BBMV 的提取 | 第59-60页 |
| 3.2.2 Cry1Ab 蛋白的同位素（~125I）标记 | 第60-61页 |
| 3.2.3 同位素（~125I）标记结果的检测 | 第61页 |
| 3.2.4 Cry1Ie2 蛋白的生物素标记及 Western Blot 检测 | 第61-62页 |
| 3.2.5 ~125I-Cry1Ab 蛋白与欧洲玉米螟 BBMV 的饱和结合分析 | 第62页 |
| 3.2.6 ~125I-Cry1Ab 与 Cry1Ie2 蛋白的竞争结合分析 | 第62-63页 |
| 3.2.7 Bio-Cry1Ie2 与 Cry1Ab 或 Cry1Fa 蛋白的竞争结合分析 | 第63页 |
| 3.3 结果 | 第63-71页 |
| 3.3.1 BBMV 的提取 | 第63-64页 |
| 3.3.2 Cry1Ab 蛋白的同位素（~125I）标记 | 第64-66页 |
| 3.3.3 Western Blot 检测 Cry1Ie2 蛋白生物素标记结果 | 第66页 |
| 3.3.4 ~125I-Cry1Ab 蛋白与欧洲玉米螟 BBMV 饱和结合分析 | 第66-68页 |
| 3.3.5 ~125I-Cry1Ab 与 Cry1Ie 蛋白的竞争结合分析 | 第68-69页 |
| 3.3.6 Bio-Cry1Ie2 与 Cry1Ab 或 Cry1Fa 蛋白的竞争结合分析 | 第69-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-72页 |
| 3.5 小结 | 第72-73页 |
| 第四章 欧洲玉米螟 BBMV 上 Cry1Ie 蛋白结合蛋白的鉴定 | 第73-83页 |
| 4.1 材料 | 第73-74页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第73页 |
| 4.1.2 常用试剂及材料 | 第73-74页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第74页 |
| 4.2 方法 | 第74-76页 |
| 4.2.1 BBMV 的溶解 | 第74页 |
| 4.2.2 BBMV 的纯化 | 第74页 |
| 4.2.3 斑点杂交分析 | 第74-75页 |
| 4.2.4 亲和纯化鉴定 Cry1Ie2 结合蛋白 | 第75-76页 |
| 4.2.5 质谱分析 Cry1Ie2 结合蛋白 | 第76页 |
| 4.3 结果 | 第76-80页 |
| 4.3.1 BBMV 的纯化 | 第76-77页 |
| 4.3.2 斑点杂交分析 | 第77-79页 |
| 4.3.3 亲和纯化鉴定 Cry1Ie2 结合蛋白 | 第79页 |
| 4.3.4 质谱分析 Cry1Ie2 结合蛋白 | 第79-80页 |
| 4.4 讨论 | 第80-81页 |
| 4.5 小结 | 第81-83页 |
| 第五章 新型 cry1Ia 基因的表达及生物活性测定 | 第83-103页 |
| 5.1 实验材料 | 第83-86页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第83-84页 |
| 5.1.2 引物及序列 | 第84-85页 |
| 5.1.3 试剂 | 第85-86页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第86页 |
| 5.2 实验方法 | 第86-91页 |
| 5.2.1 全长扩增 PCR 反应体系 | 第86-87页 |
| 5.2.2 DNA 回收 | 第87页 |
| 5.2.3 质粒酶切体系 | 第87页 |
| 5.2.4 DNA 片段连接 | 第87-88页 |
| 5.2.5 E. coil 感受态细胞的制备 | 第88页 |
| 5.2.6 E. coil 的热击转化 | 第88页 |
| 5.2.7 阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第88-89页 |
| 5.2.8 E. coil 质粒 DNA 提取 | 第89页 |
| 5.2.9 序列测定及分析 | 第89页 |
| 5.2.10 cry1Ia 基因的表达及蛋白提取 | 第89-90页 |
| 5.2.11 Cry1Ia 蛋白 SDS-PAGE 检测 | 第90页 |
| 5.2.12 质谱分析 | 第90-91页 |
| 5.2.13 生物活性测试 | 第91页 |
| 5.2.14 Cry1Ia 蛋白氨基酸序列分析 | 第91页 |
| 5.2.15 Cry1Ia 蛋白三维结构的预测 | 第91页 |
| 5.2.16 进化分析 | 第91页 |
| 5.3 结果 | 第91-100页 |
| 5.3.1 cry1Ia 基因表达菌株的构建 | 第91-93页 |
| 5.3.2 Cry1Ia 蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第93-94页 |
| 5.3.3 Cry1Ia 蛋白的质谱分析 | 第94页 |
| 5.3.4 Cry1Ia 蛋白小菜蛾生物活性测试 | 第94-95页 |
| 5.3.5 Cry1Ia 蛋白玉米螟生物活性测试 | 第95-96页 |
| 5.3.6 Cry1Ia 蛋白氨基酸序列分析 | 第96-99页 |
| 5.3.7 Cry1Ia 蛋白的进化分析 | 第99-100页 |
| 5.4 讨论 | 第100-101页 |
| 5.5 小结 | 第101-103页 |
| 结论 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-119页 |
| 作者简介及在学期间科研成果 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
