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稻瘟病菌剪接相关基因MoSMN与MoU1A的生物功能研究

中文摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
第一部分 文献综述第15-34页
    第一章 稻瘟病及其致病菌研究进展第15-27页
        1.1 稻瘟病的历史与分布第15-16页
        1.2 稻瘟病的症状和类型第16页
        1.3 稻瘟病的致病菌——稻瘟病菌第16-26页
            1.3.1 稻瘟病菌的种名演化第17页
            1.3.2 稻瘟病菌的生活史及病害循环第17-18页
            1.3.3 稻瘟病菌的致病机理第18-24页
            1.3.4 稻瘟病菌的基因组序列第24页
            1.3.5 稻瘟病菌的基因功能研究方法第24-26页
        1.4 稻瘟病的防控策略第26-27页
    第二章 Pre-mRNA 剪接及相关蛋白 SMN 与 U1A 研究进展第27-34页
        2.1 Pre-mRNA 剪接第27-29页
            2.1.1 Pre-mRNA 的剪接机制第27-28页
            2.1.2 Pre-mRNA 的选择性剪接第28-29页
        2.2 SMN 蛋白与 pre-mRNA 剪接第29-31页
            2.2.1 SMN 蛋白与 SMN 基因第29页
            2.2.2 SMN 通过参与 snRNPs 的组装影响 pre-mRNA 剪接第29-31页
        2.3 U1A 蛋白与 pre-mRNA 剪接第31-32页
            2.3.1 U1A 蛋白与 U1 snRNP 的形成第31-32页
            2.3.2 U1A 蛋白的功能复杂性第32页
        2.4 本研究的目的与意义第32-34页
第二部分 研究内容第34-142页
    第一章 MoSMN 基因的转录体鉴定及生物信息学分析第34-60页
        引言第34页
        1.1 试验材料与仪器设备第34-40页
            1.1.1 供试菌株第34-35页
            1.1.2 主要仪器设备第35页
            1.1.3 试验主要试剂第35-36页
            1.1.4 载体与引物第36-37页
            1.1.5 试验所用培养基第37-38页
            1.1.6 试验所用其它储备液及配制方法第38-40页
        1.2 研究方法第40-47页
            1.2.1 稻瘟病菌基因组 DNA 的提取第40-41页
            1.2.2 稻瘟病菌 RNA 的提取第41页
            1.2.3 反转录生成 1st-Strand cDNA第41-42页
            1.2.4 稻瘟病菌 MOS 基因及其相应 cDNA 的克隆第42-43页
            1.2.5 热激感受态大肠杆菌 DH5α的制备与转化第43-44页
            1.2.6 稻瘟病菌 MOS 基因的 Southern blotting 分析第44-46页
            1.2.7 生物信息学分析方法第46-47页
        1.3 结果与分析第47-58页
            1.3.1 稻瘟病菌 MOS 基因的克隆及拷贝数分析第47-48页
            1.3.2 稻瘟病菌 MOS 基因的转录体与选择性剪接第48-51页
            1.3.3 稻瘟病菌 MOS 基因三种转录体对应的蛋白质序列分析第51-52页
            1.3.4 稻瘟病菌 MOS 蛋白体的理化特性分析第52-53页
            1.3.5 稻瘟病菌 MOS 蛋白体的保守性与进化分析第53-55页
            1.3.6 稻瘟病菌 MOS 蛋白体的空间结构预测分析第55-58页
        1.4 讨论与小结第58-60页
            1.4.1 讨论第58-59页
            1.4.2 小结第59-60页
    第二章 MOS 基因的生物功能分析第60-97页
        引言第60页
        2.1 试验材料与仪器设备第60-66页
            2.1.1 供试菌株第60-61页
            2.1.2 主要仪器设备第61页
            2.1.3 试验主要试剂第61-62页
            2.1.4 载体与引物第62-63页
            2.1.5 试验所用培养基第63-65页
            2.1.6 试验所用其它储备液及配制方法第65-66页
        2.2 研究方法第66-76页
            2.2.1 稻瘟病菌基因组 DNA 的提取第66-67页
            2.2.2 稻瘟病菌 RNA 的提取与反转录生成 1st-Strand cDNA第67页
            2.2.3 细菌质粒 DNA 的提取方法第67-68页
            2.2.4 热激感受态大肠杆菌 DH5α的制备与转化第68页
            2.2.5 土壤农杆菌 AGL-1 热激感受态的制备与转化第68-69页
            2.2.6 敲除载体与互补载体的构建第69-71页
            2.2.7 稻瘟病菌的遗传转化(土壤农杆菌介导法)第71-72页
            2.2.8 稻瘟病菌敲除突变体的检测与确认第72-73页
            2.2.9 稻瘟病菌互补菌株的检测与确认第73-74页
            2.2.10 敲除突变体的生长发育特性分析第74页
            2.2.11 敲除突变体菌丝色素的观察与含量测定第74-75页
            2.2.12 敲除突变体的逆境形态观察与分析第75页
            2.2.13 逆境条件下及不同生长发育阶段的基因表达分析第75-76页
            2.2.14 敲除突变体的致病性分析及洋葱表皮细胞的侵入研究第76页
        2.3 结果与分析第76-94页
            2.3.1 MOS 基因敲除载体及互补载体的构建与验证第76-79页
            2.3.2 敲除突变体与互补菌株的 PCR 检测及获得第79-81页
            2.3.3 Southern blotting 和 RT-PCR 检测 MOS 基因的敲除与互补第81-82页
            2.3.4 MOS 基因敲除对稻瘟病菌菌丝的生长速率无明显影响第82-83页
            2.3.5 MOS 基因敲除影响稻瘟病菌菌丝色素的形成第83-84页
            2.3.6 MOS 基因与分生孢子的形态及附着胞的形成无关第84-86页
            2.3.7 MOS 基因敲除影响稻瘟病菌分生孢子的产生数量第86-87页
            2.3.8 MOS 基因参与稻瘟病菌的逆境应答第87-92页
            2.3.9 稻瘟病菌的致病需要 MOS 基因的参与第92-94页
        2.4 讨论与小结第94-97页
            2.4.1 讨论第94-96页
            2.4.2 小结第96-97页
    第三章 氧化逆境下 MOS 基因调控的转录组分析第97-113页
        引言第97页
        3.1 试验材料与仪器设备第97-98页
            3.1.1 供试菌株第97页
            3.1.2 主要仪器设备第97-98页
            3.1.3 试验主要试剂第98页
        3.2 研究方法第98-101页
            3.2.1 试验菌株的培养与处理第98页
            3.2.2 试验菌株中总 RNA 的提取第98-99页
            3.2.3 测序文库的制备第99页
            3.2.4 高通量测序第99页
            3.2.5 测序质量及与参考序列的比对分析第99页
            3.2.6 基因差异表达分析的方法第99-100页
            3.2.7 氧化逆境下差异表达基因的 GO 与 Pathway 显著富集分析第100-101页
            3.2.8 氧化逆境下选择性剪接事件分析第101页
        3.3 结果与分析第101-111页
            3.3.1 试验样品的质量分析第101-102页
            3.3.2 测序质量及与参考序列的比对分析第102-103页
            3.3.3 氧化逆境下基因表达的差异分析第103-105页
            3.3.4 氧化逆境下差异表达基因的 GO 显著富集分析第105-107页
            3.3.5 氧化逆境下差异表达基因的 Pathway 显著富集分析第107页
            3.3.6 氧化逆境下选择性剪接事件分析第107-111页
        3.4 讨论与小结第111-113页
            3.4.1 讨论第111-112页
            3.4.2 小结第112-113页
    第四章 MoU1A 基因的生物功能分析第113-138页
        引言第113页
        4.1 试验材料与仪器设备第113-117页
            4.1.1 供试菌株第113-114页
            4.1.2 主要仪器设备第114页
            4.1.3 试验主要试剂第114页
            4.1.4 载体与引物第114-115页
            4.1.5 试验所用培养基第115-116页
            4.1.6 试验所用其它储备液及配制方法第116-117页
        4.2 研究方法第117-122页
            4.2.1 MoU1A 基因的生物信息学分析方法第117页
            4.2.2 稻瘟病菌基因组 DNA 的提取第117页
            4.2.3 稻瘟病菌 RNA 的提取与反转录生成 1st-Strand cDNA第117页
            4.2.4 细菌质粒 DNA 的提取方法第117页
            4.2.5 热激感受态大肠杆菌 DH5α的制备与转化第117页
            4.2.6 土壤农杆菌 AGL-1 热激感受态的制备与转化第117-118页
            4.2.7 基因沉默载体与过表达载体的构建第118-119页
            4.2.8 稻瘟病菌的遗传转化(PEG 介导法)第119-120页
            4.2.9 稻瘟病菌的遗传转化(土壤农杆菌介导法)第120页
            4.2.10 稻瘟病菌基因沉默突变体及过表达菌株的检测和确认第120-121页
            4.2.11 基因沉默突变体与过表达菌株的生长发育特性分析第121页
            4.2.12 基因沉默突变体和过表达菌株的逆境观察与分析第121-122页
            4.2.13 基因沉默突变体与过表达菌株的致病性分析和侵入研究第122页
        4.3 结果与分析第122-135页
            4.3.1 稻瘟病菌 MoU1A 基因基本信息的获取及相应蛋白特性的预测第122-123页
            4.3.2 稻瘟病菌 MoU1A 蛋白的保守性与进化分析第123-125页
            4.3.3 稻瘟病菌 MoU1A 蛋白的空间结构预测分析第125-127页
            4.3.4 MoU1A 基因的 RNAi 突变体及过表达菌株的获得第127-128页
            4.3.5 MoU1A 基因与稻瘟病菌的菌丝生长第128-129页
            4.3.6 MoU1A 基因与稻瘟病菌的产孢数量、孢子形态及附着胞形成第129-131页
            4.3.7 MoU1A 基因与稻瘟病菌的逆境应答第131-133页
            4.3.8 MoU1A 基因与稻瘟病菌的致病性第133-135页
        4.4 讨论与小结第135-138页
            4.4.1 讨论第135-136页
            4.4.2 小结第136-138页
    第五章 全文结论与讨论第138-142页
        5.1 全文结论第138页
        5.2 全文讨论第138-142页
参考文献第142-162页
作者简介第162页
攻读博士学位期间的主要学术成果第162-163页
致谢第163页

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