| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-42页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第15-16页 |
| 1.2 植物雄性不育研究进展 | 第16-31页 |
| 1.2.1 细胞质雄性不育 | 第18-21页 |
| 1.2.2 细胞核雄性不育 | 第21-23页 |
| 1.2.3 水稻光温敏雄性核不育研究进展 | 第23-31页 |
| 1.2.3.1 光温敏雄性核不育水稻的发现及其光温特性 | 第23-25页 |
| 1.2.3.2 水稻光敏雄性核不育基因的定位和克隆 | 第25-29页 |
| 1.2.3.3 水稻温敏雄性核不育基因的定位和克隆 | 第29-31页 |
| 1.3 Long non-coding RNA研究进展 | 第31-36页 |
| 1.3.1 Long non-coding RNA的定义，分类及功能 | 第31-34页 |
| 1.3.2 植物lncRNA研究进展 | 第34-36页 |
| 1.4 植物phasiRNA研究进展 | 第36-42页 |
| 1.4.1 tasiRNA的发现和形成过程 | 第37-39页 |
| 1.4.2 phasiRNA的形成和特异表达 | 第39-42页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第42页 |
| 2 材料和方法 | 第42-63页 |
| 2.1 水稻材料及田间种植 | 第42-44页 |
| 2.2 定位群体的构建 | 第44-45页 |
| 2.3 分子标记的开发 | 第45页 |
| 2.4 转化载体及菌株 | 第45-46页 |
| 2.5 遗传转化载体构建及转化 | 第46-53页 |
| 2.5.1 互补载体构建 | 第46-50页 |
| 2.5.2 抑制载体构建 | 第50-51页 |
| 2.5.3 超表达载体构建 | 第51-52页 |
| 2.5.4 Target mimicry载体构建 | 第52-53页 |
| 2.5.5 农杆菌介导的遗传转化 | 第53页 |
| 2.6 水稻育性考察 | 第53-54页 |
| 2.7 水稻总DNA抽提 | 第54-55页 |
| 2.8 水稻材料基因型检测与转基因植株Southern blot拷贝数分析 | 第55-56页 |
| 2.9 水稻总RNA抽提 | 第56页 |
| 2.10 RACE与 5’RLM-RACE | 第56-58页 |
| 2.11 基因表达量分析与small RNA表达量分析 | 第58-61页 |
| 2.11.1 RT-PCR与qPCR | 第58-60页 |
| 2.11.2 Stem-loop RT-PCR与page-northern blot | 第60-61页 |
| 2.11.3 RPA (Ribonuclease Protection Assay) | 第61页 |
| 2.12 Small RNA-seq及PARE文库构建 | 第61-62页 |
| 2.13 DNA甲基化分析 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-133页 |
| 3.1 前人定位结果的验证 | 第63-66页 |
| 3.2 pms1显隐性关系的确定 | 第66-69页 |
| 3.3 pms1的精细定位 | 第69-74页 |
| 3.3.1 分子标记的获得 | 第69-71页 |
| 3.3.2 图位克隆pms1 | 第71-74页 |
| 3.4 pms1候选基因的分离和验证 | 第74-84页 |
| 3.4.1 互补转化结果 | 第75-78页 |
| 3.4.2 RACE确定pms1转录本 | 第78-79页 |
| 3.4.3 抑制PMS1T表达的转化结果 | 第79-82页 |
| 3.4.4 超量表达PMS1T的转化结果 | 第82-84页 |
| 3.5 PMS1T表达谱分析 | 第84-89页 |
| 3.6 PMS1T是一个long non-coding RNA | 第89-92页 |
| 3.7 确定pms1的功能性序列差异 | 第92-99页 |
| 3.7.1 比较测序确定SNP S2是功能性序列差异 | 第92-93页 |
| 3.7.2 65 bp插入对光敏感雄性不育的影响 | 第93-99页 |
| 3.8 PMS1T是PHAS基因 | 第99-119页 |
| 3.8.1 PMS1T是miR2118的靶基因 | 第99-111页 |
| 3.8.1.1 实验验证PMS1T被mi R2118剪切 | 第99-102页 |
| 3.8.1.2 miR2118家族表达量分析 | 第102-107页 |
| 3.8.1.3 miR2118介导的剪切对光敏感雄性不育的重要性 | 第107-108页 |
| 3.8.1.4 Targetmimicry | 第108-111页 |
| 3.8.2 PMS1T产生phasiRNA | 第111-119页 |
| 3.8.2.1 PMS1T区段产生大量小RNA | 第111-114页 |
| 3.8.2.2 比较分析农垦58S和NIL(MH)中PMS1T-phasiRNA的表达 | 第114-116页 |
| 3.8.2.3 转基因材料中PMS1T-phasiRNA分析 | 第116-118页 |
| 3.8.2.4 PMS1T-phasiRNA的验证 | 第118-119页 |
| 3.9 SNP S2与PMS1T-phasiRNA | 第119-131页 |
| 3.9.1 SNP S2对miR2118介导的剪切效率的影响 | 第120-122页 |
| 3.9.2 PMS1T-phasiRNA可能的靶基因 | 第122-131页 |
| 3.10 PMS1T区间DNA甲基化分析 | 第131-133页 |
| 4 讨论 | 第133-142页 |
| 4.1 pms1的作用机理研究 | 第133-136页 |
| 4.2 未来研究方向 | 第136-138页 |
| 4.3 应用前景 | 第138页 |
| 4.4 Small peptide与lncRNA | 第138-139页 |
| 4.5 phasiRNA与雄性不育 | 第139-140页 |
| 4.6 pms1与pms3间关系的讨论 | 第140-142页 |
| 参考文献 | 第142-163页 |
| 附录Ⅰ 实验所用引物信息 | 第163-169页 |
| 附录Ⅱ 在读期间研究成果 | 第169-170页 |
| 致谢 | 第170-172页 |
