| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 哺乳动物多能性干细胞研究概况 | 第12页 |
| 1.2 诱导多能性干细胞技术的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 核移植技术 | 第13页 |
| 1.2.2 诱导多能性干细胞技术 | 第13-14页 |
| 1.3 小鼠诱导型多能干细胞 | 第14-17页 |
| 1.4 人诱导型多能干细胞 | 第17-18页 |
| 1.5 猪诱导型多能干细胞 | 第18-20页 |
| 1.6 不同实验室诱导的猪多能干细胞比较 | 第20-24页 |
| 1.7 猪诱导型多能干细胞存在的问题 | 第24-25页 |
| 1.8 本研究在猪遗传育种中的重要意义 | 第25-28页 |
| 1.8.1 猪ESC建立 | 第25-26页 |
| 1.8.2 转基因猪生产 | 第26页 |
| 1.8.3 猪遗传资源保存与利用 | 第26-28页 |
| 第二章 两种来源piPSCs产生效率和体外增殖能力的影响因素研究 | 第28-74页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-44页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第28页 |
| 2.1.2 药品与试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.4 巴马小型猪耳缘组织成纤维细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.1.5 巴马小型猪骨髓间充质干细胞分离培养 | 第31-32页 |
| 2.1.6 慢病毒包装和滴度测定 | 第32-34页 |
| 2.1.7 慢病毒诱导巴马小型猪成纤维细胞/骨髓间充质干细胞来源多能性干细胞 | 第34-36页 |
| 2.1.8 巴马小型猪iPSCs鉴定 | 第36-39页 |
| 2.1.9 不同饲养层对巴马小型猪iPSCs体外增殖能力的影响 | 第39-40页 |
| 2.1.10 传代方式对巴马小型猪iPSCs增殖能力的影响 | 第40页 |
| 2.1.11 ROCK抑制剂对巴马小型猪iPSCs冻存复苏率的影响 | 第40页 |
| 2.1.12 细胞周期蛋白对巴马小型猪iPSCs增殖的影响 | 第40-43页 |
| 2.1.13 克隆形成率计算 | 第43页 |
| 2.1.14 克隆倍增时间的计算 | 第43页 |
| 2.1.15 数据分析 | 第43-44页 |
| 2.2 结果 | 第44-65页 |
| 2.2.1 巴马小型猪耳缘组织成纤维细胞和骨髓间充质干细胞分离培养 | 第44页 |
| 2.2.2 多能性基因比对分析及其慢病毒载体鉴定 | 第44-46页 |
| 2.2.3 慢病毒的包装及滴度测定 | 第46-47页 |
| 2.2.4 慢病毒感染复数的确定 | 第47-48页 |
| 2.2.5 慢病毒诱导巴马小型猪成纤维细胞/骨髓间充质干细胞来源多能性干细胞 | 第48-49页 |
| 2.2.6 猪成纤维细胞和骨髓间充质干细胞诱导多能干细胞的形态学观察 | 第49-51页 |
| 2.2.7 碱性磷酸酶活性检测 | 第51页 |
| 2.2.8 干细胞表面标记的免疫荧光检测 | 第51-53页 |
| 2.2.9 干细胞内外源基因的表达分析 | 第53-55页 |
| 2.2.10 核型分析 | 第55页 |
| 2.2.11 类胚体形成实验 | 第55-56页 |
| 2.2.12 巴马小型猪iPSCs体外分化能力检测 | 第56页 |
| 2.2.13 巴马小型猪iPSCs畸胎瘤形成实验 | 第56-57页 |
| 2.2.14 不同饲养层对猪诱导型多能干细胞体外增殖能力的影响 | 第57-58页 |
| 2.2.15 传代方式对猪诱导型多能性干细胞增殖能力的影响 | 第58-59页 |
| 2.2.16 ROCK抑制剂对猪诱导型多能性干细胞复苏率的影响 | 第59-61页 |
| 2.2.17 细胞周期蛋白对猪诱导型多能性干细胞增殖的影响 | 第61-65页 |
| 2.3 讨论 | 第65-74页 |
| 第三章 两种状态piPSCs的生物学特性和分子调控机制研究 | 第74-94页 |
| 3.1 材料 | 第74-76页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第74-75页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第75页 |
| 3.1.3 试剂的配制 | 第75-76页 |
| 3.1.4 主要仪器及耗材 | 第76页 |
| 3.2 试验方法 | 第76-81页 |
| 3.2.1 piPB4-6细胞的培养 | 第76-77页 |
| 3.2.2 小鼠ES细胞样猪iPS细胞的获得及培养 | 第77页 |
| 3.2.3 单位面积克隆数的统计 | 第77页 |
| 3.2.4 细胞活性分析 | 第77-78页 |
| 3.2.5 单克隆形成率 | 第78页 |
| 3.2.6 piPB4-6_m细胞的鉴定分析 | 第78页 |
| 3.2.7 X染色体状态的检测 | 第78页 |
| 3.2.8 piPB4-6_h和piPB4-6_m细胞信号通路相关基因表达模式 | 第78-80页 |
| 3.2.9 piPB4-6_h和piPB4-6_m的DLK-DIO3印记区间检测 | 第80页 |
| 3.2.10 数据统计 | 第80-81页 |
| 3.3 结果 | 第81-90页 |
| 3.3.1 小鼠ES细胞样猪iPSCs的培养 | 第81-82页 |
| 3.3.2 单位面积克隆数的统计 | 第82页 |
| 3.3.3 细胞活性分析 | 第82-83页 |
| 3.3.4 单细胞克隆形成率 | 第83页 |
| 3.3.5 piPB4-6_m细胞的鉴定分析 | 第83-87页 |
| 3.3.7 piPB4-6_m和piPB4-6_h X染色体状态的检测 | 第87-88页 |
| 3.3.8 piPB4-6_m和piPB4-6_h细胞信号通路相关基因表达模式 | 第88-89页 |
| 3.3.9 piPB4-6_m和piPB4-6_h的DLK-D103印记区间检测 | 第89-90页 |
| 3.4. 讨论 | 第90-94页 |
| 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 博士、博士后期间发表论文 | 第105-107页 |
| 个人简介 | 第107页 |
