| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒简介 | 第13页 |
| 1.1.2 PRRSV基因组结构 | 第13-15页 |
| 1.1.3 PRRSV逃避天然免疫研究进展 | 第15页 |
| 1.1.4 Nsp1α 研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 SUMO化修饰研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 SUMO化修饰简介 | 第16-18页 |
| 1.2.2 PIAS蛋白家族简介 | 第18-19页 |
| 1.2.3 病毒与SUMO化修饰 | 第19-20页 |
| 1.3 酵母双杂交研究进展 | 第20-22页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第3章 材料与方法 | 第23-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 3.1.1 细胞、毒株与菌株 | 第23页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第23-25页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.4 Western Blot以及CO-IP实验所需材料 | 第26页 |
| 3.1.5 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第26-29页 |
| 3.1.5.1 质粒构建相关试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.5.2 细胞培养相关试剂 | 第27页 |
| 3.1.5.3 Western Blot缓冲液和试剂及蛋白提取试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.5.4 酵母双杂交相关试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.6 主要实验仪器及设备 | 第29页 |
| 3.1.7 分子生物学分析软件 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 3.2.1 细胞样品总RNA的提取、RT-PCR | 第29-30页 |
| 3.2.1.1 总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 3.2.1.2 cDNA的合成 | 第30页 |
| 3.2.2 目的序列的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 3.2.3 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第31页 |
| 3.2.4 PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第31页 |
| 3.2.5 外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第31-32页 |
| 3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第32页 |
| 3.2.7 连接产物的转化 | 第32页 |
| 3.2.8 重组质粒的制备与鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.8.1 质粒的小量制备 | 第32页 |
| 3.2.8.2 质粒的大量制备 | 第32-33页 |
| 3.2.8.3 质粒DNA的定量 | 第33页 |
| 3.2.8.4 重组质粒（阳性质粒）的鉴定 | 第33页 |
| 3.2.9 酵母双杂交筛选互作蛋白 | 第33-34页 |
| 3.2.9.1 酵母感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 3.2.9.2 质粒转化酵母感受态细胞 | 第34页 |
| 3.2.9.3 酵母融合质粒的自激活和毒性检测 | 第34页 |
| 3.2.10 质粒的转染（脂质体介导的瞬时转染法） | 第34-35页 |
| 3.2.11 双荧光素酶报告基因检测 | 第35页 |
| 3.2.12 Western Blot检测目的基因在真核细胞中的表达和互作 | 第35-37页 |
| 3.2.12.1 免疫共沉淀样品制备 | 第35-36页 |
| 3.2.12.2 蛋白表达样品制备 | 第36页 |
| 3.2.12.3 SDS-PAGE电泳 | 第36页 |
| 3.2.12.4 Western Blot检测分析 | 第36-37页 |
| 3.2.13 荧光共聚焦检测蛋白质的亚细胞定位 | 第37-38页 |
| 3.2.14 统计学方法 | 第38-39页 |
| 第4章 结果与分析 | 第39-51页 |
| 4.1. 酵母双杂交系统分析Nsp1α 与SUMO化修饰系统相关蛋白PIAS1、UBC9的相互作用 | 第39-41页 |
| 4.1.1 相关酵母重组质粒的构建 | 第39-41页 |
| 4.1.2 酵母双杂交系统分析Nsp1α 与PIAS1、UBC9的相互作用 | 第41页 |
| 4.2 免疫共沉淀验证细胞内PIAS1与Nsp1α 的互作关系 | 第41-43页 |
| 4.3 Nsp1α 的SUMO化修饰的探索 | 第43-44页 |
| 4.4 Nsp1α 阻碍细胞内SUMO化修饰的探索 | 第44-46页 |
| 4.5 Nsp1α 通过阻碍IRF3的SUMO化修饰，促进IRF3的降解 | 第46-48页 |
| 4.6 Nsp1α 及其突变体的分析 | 第48-51页 |
| 4.6.1 Nsp1α 及其突变体对细胞内SUMO化修饰的影响 | 第48页 |
| 4.6.2 Nsp1α 及其突变体对IFN-β 启动子的影响 | 第48-51页 |
| 第5章 讨论 | 第51-53页 |
| 第6章 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
