| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第13-28页 |
| 1.1 大额牛研究概况 | 第13-14页 |
| 1.1.1 大额牛的简介 | 第13页 |
| 1.1.2 大额牛的研究概况 | 第13-14页 |
| 1.2 纤维素 | 第14-15页 |
| 1.3 纤维素酶 | 第15-21页 |
| 1.3.1 纤维素酶的组成 | 第15-16页 |
| 1.3.2 纤维素酶的结构及作用机制 | 第16-18页 |
| 1.3.3 纤维素酶的来源 | 第18-19页 |
| 1.3.4 纤维素酶基因的克隆 | 第19-21页 |
| 1.4 纤维素分解菌的研究概况 | 第21-23页 |
| 1.5 纤维素酶的应用 | 第23-26页 |
| 1.5.1 纤维素酶在饲料生产中的应用 | 第23页 |
| 1.5.2 纤维素酶在食品工业中的应用 | 第23-24页 |
| 1.5.3 纤维素酶在酿酒工业中的应用 | 第24页 |
| 1.5.4 纤维素酶在纺织工业中的应用 | 第24-25页 |
| 1.5.5 纤维素酶在造纸工业中的应用 | 第25页 |
| 1.5.6 纤维素酶在医药工业中的应用 | 第25页 |
| 1.5.7 纤维素酶在其他领域中的的应用 | 第25-26页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 1.7 研究内容 | 第27-28页 |
| 第2章 大额牛粪便纤维素酶产生菌的筛选、分离和鉴定 | 第28-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第30页 |
| 2.1.6 引物合成与DNA测序 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.2.1 纤维素酶产生菌的筛选和分离 | 第31页 |
| 2.2.2 细菌总DNA的提取方法 | 第31页 |
| 2.2.3 细菌 16S rRNA的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.4 细菌的 16S rRNA鉴定 | 第32页 |
| 2.2.5 细菌的生理生化鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第33-37页 |
| 2.3.1 菌株的筛选 | 第33-34页 |
| 2.3.2 细菌总DNA的提取 | 第34页 |
| 2.3.3 细菌的 16S rRNA鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 细菌的生理生化鉴定 | 第35-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第3章 纤维素酶产生菌YD236的全基因组测序 | 第38-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌株 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 3.1.4 常用培养基 | 第38-39页 |
| 3.1.5 常用溶液 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 YD236菌株的基因组DNA的大量提取 | 第39页 |
| 3.2.2 YD236菌株测序文库的制备 | 第39-40页 |
| 3.2.3 YD236菌株的测序及分析 | 第40-41页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第41-44页 |
| 3.3.1 YD236菌株的基因组DNA的大量提取 | 第41页 |
| 3.3.2 YD236菌株的测序文库的制备 | 第41-43页 |
| 3.3.3 YD236菌株的测序及分析 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44页 |
| 3.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 重组 β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶的基因表达、纯化及酶学性质 | 第45-85页 |
| 4.1 实验材料 | 第45-47页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第45页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 4.1.4 主要培养基 | 第46页 |
| 4.1.5 主要溶液 | 第46-47页 |
| 4.1.6 DNA测序与引物合成 | 第47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-58页 |
| 4.2.1 感受态的制备 | 第47-48页 |
| 4.2.2 序列分析 | 第48页 |
| 4.2.3 原核表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 4.2.4 重组质粒的转化 | 第50页 |
| 4.2.5 重组酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第50页 |
| 4.2.6 重组酶的纯化和鉴定 | 第50-52页 |
| 4.2.7 重组酶的定量 | 第52页 |
| 4.2.8 酶活测定方法 | 第52-54页 |
| 4.2.9 酶学特性分析 | 第54-58页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第58-79页 |
| 4.3.1 pglue3的序列分析 | 第58-60页 |
| 4.3.2 pglue8的序列分析 | 第60-62页 |
| 4.3.3 重组PgluE3的基因表达、纯化及酶学性质研究 | 第62-70页 |
| 4.3.4 重组PgluE8的基因表达、纯化及酶学性质研究 | 第70-79页 |
| 4.4 讨论 | 第79-83页 |
| 4.5 本章小结 | 第83-85页 |
| 第5章 重组 β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶定点突变的研究 | 第85-96页 |
| 5.1 实验材料 | 第85-86页 |
| 5.1.1 菌株 | 第85页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第85页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第85页 |
| 5.1.4 常用培养基 | 第85页 |
| 5.1.5 常用溶液 | 第85-86页 |
| 5.1.6 引物合成与DNA测序 | 第86页 |
| 5.2 实验方法 | 第86-88页 |
| 5.2.1 重组重组 β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶基因序列的突变位点分析 | 第86页 |
| 5.2.2 重组重组 β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶基因的定点突变 | 第86-88页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第88-94页 |
| 5.3.1 PgluE3和PgluE8的催化活性位点分析 | 第88-89页 |
| 5.3.2 突变型重组 β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶的制备 | 第89-94页 |
| 5.4 讨论 | 第94-95页 |
| 5.5 本章小结 | 第95-96页 |
| 第6章 总结与展望 | 第96-100页 |
| 6.1 总结 | 第96-98页 |
| 6.2 创新 | 第98-99页 |
| 6.3 展望 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-112页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第112-113页 |
| 附录 | 第113-117页 |
| 附录A 实验中所使用的缓冲液的配置 | 第113-114页 |
| A1 不同pH值的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制 | 第113页 |
| A2 不同pH值的甘氨酸-NaOH缓冲液的配制 | 第113-114页 |
| A3 不同pH值的Tris-HCl缓冲液的配制 | 第114页 |
| A4 不同pH值的磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液的配制 | 第114页 |
| 附录B 重组 β-葡萄糖苷酶基因pglue3序列 | 第114-116页 |
| 附录C 重组 β-葡萄糖苷酶PgluE3的氨基酸序列 | 第116-117页 |
| 附录D 氨基酸中英文对照及缩写表 | 第117页 |
