| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 蛋白质翻译后修饰 | 第11-13页 |
| 1.1.1 蛋白质翻译后修饰的定义 | 第11页 |
| 1.1.2 蛋白质翻译后修饰的种类 | 第11-13页 |
| 1.2 消去化修饰 | 第13-15页 |
| 1.2.1 消去化修饰定义 | 第13-14页 |
| 1.2.2 消去化修饰的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 大肠杆菌中苹果酸脱氢酶 | 第15-16页 |
| 1.3.1 苹果酸脱氢酶的酶学性质 | 第15-16页 |
| 1.3.2 苹果酸脱氢酶参与的代谢途径 | 第16页 |
| 1.4 大肠杆菌中的丝氨酸乙酰转移酶 | 第16-19页 |
| 1.4.1 丝氨酸乙酰转移酶的酶学性质 | 第16页 |
| 1.4.2 丝氨酸乙酰转移酶参与的代谢途径 | 第16-19页 |
| 第2章 引言 | 第19-21页 |
| 2.1 研究背景 | 第19页 |
| 2.2 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第3章 材料与方法 | 第21-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 3.1.1 菌株以及重组质粒 | 第21页 |
| 3.1.2 其他实验所用基本材料 | 第21-22页 |
| 3.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 3.3 实验仪器 | 第23页 |
| 3.4 实验方法 | 第23-33页 |
| 3.4.1 重组质粒的构建 | 第23-25页 |
| 3.4.2 目的蛋白的诱导与表达 | 第25页 |
| 3.4.3 用bio-SH试剂标记目的蛋白 | 第25-26页 |
| 3.4.4 纯化富集bio-SH试剂标记的目的蛋白 | 第26页 |
| 3.4.5 柱上酶切及目的肽段的洗脱 | 第26-28页 |
| 3.4.6 大肠杆菌中目的基因的敲除与回补 | 第28-33页 |
| 第4章 结果与分析 | 第33-43页 |
| 4.1 重组质粒Pet28a-MDH, Pet28a-CysE的构建及结果 | 第33页 |
| 4.2 大肠杆菌中苹果酸脱氢酶（MDH）与丝氨酸乙酰转移酶（CysE）的诱导表达及纯化结果 | 第33-34页 |
| 4.3 MDH与CysE的化学标记效率检测 | 第34-35页 |
| 4.4 利用DTT与bio-SH试剂竞争来检测反应的特异性 | 第35页 |
| 4.5 bio-SH试剂标记的目的蛋白富集效果 | 第35-36页 |
| 4.6 柱上酶解后肽段标记效率检测 | 第36-37页 |
| 4.7 大肠杆菌中MDH缺失菌株的建立 | 第37-43页 |
| 4.7.1 sgRNA的设计 | 第37-38页 |
| 4.7.2 sgRNA载体构建结果 | 第38页 |
| 4.7.3 MDH基因同源臂的构建结果 | 第38-39页 |
| 4.7.4 Ptarget-MDH载体构建结果 | 第39页 |
| 4.7.5 大肠杆菌中MDH基因敲除效率检测 | 第39-40页 |
| 4.7.6 回补质粒 6p2sumo-MDH的构建 | 第40-41页 |
| 4.7.7 缺陷菌株中MDH基因回补后诱导表达与纯化结果 | 第41页 |
| 4.7.8 缺陷株中表达的目的蛋白进行标记检测 | 第41-43页 |
| 第5章 讨论与总结 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 在读期间所发表的论文与科研情况 | 第53页 |
