| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 母乳概述 | 第11-12页 |
| 1.2 抗菌肽概述 | 第12-16页 |
| 1.2.1 抗菌肽分类 | 第12-13页 |
| 1.2.2 抗菌肽来源 | 第13-14页 |
| 1.2.3 抗菌肽生物活性 | 第14-16页 |
| 1.3 基因工程表达系统和策略研究 | 第16-20页 |
| 1.3.1 质粒和菌株 | 第16-17页 |
| 1.3.2 抗菌肽表达策略 | 第17-18页 |
| 1.3.3 抗菌肽的修饰改造 | 第18-20页 |
| 1.4 抗菌肽活性鉴定 | 第20-21页 |
| 1.4.1 琼脂糖孔穴扩散法 | 第20-21页 |
| 1.4.2 比浊法 | 第21页 |
| 1.4.3 活菌计数法 | 第21页 |
| 1.5 抗菌肽抗菌机理 | 第21-23页 |
| 1.5.1 细胞膜破坏模式 | 第22-23页 |
| 1.5.2 细菌胞内靶点 | 第23页 |
| 1.5.3 免疫效应分子 | 第23页 |
| 1.6 抗菌肽应用前景 | 第23-25页 |
| 1.6.1 抗菌肽在基因工程方面的应用 | 第23-24页 |
| 1.6.2 抗菌肽在医药方面的应用 | 第24页 |
| 1.6.3 抗菌肽在动物饲料方面的应用 | 第24页 |
| 1.6.4 抗菌肽在食品方面的应用 | 第24-25页 |
| 1.7 本研究的意义和内容 | 第25-26页 |
| 1.7.1 本课题的研究内容 | 第25页 |
| 1.7.2 本课题研究意义 | 第25-26页 |
| 第2章 母乳中内源性多肽的分离及抗菌功能初步鉴定 | 第26-37页 |
| 2.1 材料与设备 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.1.2 实验主要材料及试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验仪器及设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 母乳脱脂 | 第28页 |
| 2.2.2 超滤分离小分子多肽 | 第28-29页 |
| 2.2.3 母乳中多肽分离测定——Tricine-SDS-PAGE | 第29-30页 |
| 2.2.4 内源性多肽抑菌实验 | 第30-31页 |
| 2.2.5 LC-MS/MS鉴定内源性多肽 | 第31页 |
| 2.2.6 生物信息学分析预测抗菌成分 | 第31页 |
| 2.2.7 化学合成预测抗菌肽活性测定 | 第31页 |
| 2.3 实验结果 | 第31-35页 |
| 2.3.1 母乳中内源性多肽的分离鉴定(Tricine-SDS-PAGE) | 第32-33页 |
| 2.3.3 生物信息学预测抗菌成分 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第3章 CN20在大肠杆菌中的克隆、表达优化及蛋白纯化 | 第37-61页 |
| 3.1 材料与设备 | 第37-41页 |
| 3.1.1 引物 | 第37页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第37-38页 |
| 3.1.3 培养基及抗生素 | 第38-39页 |
| 3.1.4 工具酶及试剂盒 | 第39页 |
| 3.1.5 实验主要试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.6 实验仪器与设备 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-49页 |
| 3.2.1 CN20原核表达载体的构建 | 第41-46页 |
| 3.2.2 CN20表达条件的优化 | 第46-47页 |
| 3.2.3 CN20融合蛋白纯化及western-Blot鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.4 CN20融合蛋白标签切除 | 第48-49页 |
| 3.2.5 CN20蛋白浓度测定 | 第49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-59页 |
| 3.3.1 密码子优化 | 第49-51页 |
| 3.3.2 表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.3 CN20融合蛋白诱导表达 | 第52页 |
| 3.3.4 融合蛋白表达条件优化 | 第52-56页 |
| 3.3.5 CN20融合蛋白纯化及western-Blot鉴定 | 第56-58页 |
| 3.3.6 CN20融合蛋白标签切除 | 第58页 |
| 3.3.7 CN20蛋白浓度测定 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第4章 CN20抗菌活性研究 | 第61-67页 |
| 4.1 材料与设备 | 第61-62页 |
| 4.1.1 菌种 | 第61页 |
| 4.1.2 培养基 | 第61页 |
| 4.1.3 实验仪器与设备 | 第61-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-63页 |
| 4.2.1 抗菌肽抗菌活性检测 | 第62页 |
| 4.2.2 抗菌谱的测定 | 第62页 |
| 4.2.3 抗菌效果与抗菌时间的关系研究 | 第62-63页 |
| 4.2.4 数据处理与分析 | 第63页 |
| 4.3 实验结果 | 第63-65页 |
| 4.3.1 抗菌肽抗菌活性检测 | 第63页 |
| 4.3.2 抗菌谱的测定 | 第63-64页 |
| 4.3.3 抗菌肽抗菌效果与抗菌时间的关系研究 | 第64-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-67页 |
| 全文结论 | 第67-68页 |
| 论文创新点 | 第68-69页 |
| 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
