| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| ·黄瓜绿斑驳花叶病毒研究进展 | 第11-14页 |
| ·黄瓜绿斑驳花叶病毒病的发生及危害 | 第11页 |
| ·CGMMV 的症状 | 第11-12页 |
| ·CGMMV 基因组结构与功能 | 第12-13页 |
| ·CGMMV 的寄主范围和传播途径 | 第13页 |
| ·CGMMV 的防治 | 第13-14页 |
| ·酵母双杂交系统及其在植物病毒学中的应用 | 第14-18页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第14-15页 |
| ·酵母双杂交系统的特点 | 第15-16页 |
| ·酵母双杂交系统的发展 | 第16-17页 |
| ·酵母双杂交系统在植物病毒学的应用 | 第17-18页 |
| ·双分子荧光互补技术 | 第18-19页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 CGMMV 外壳蛋白基因的克隆及酵母表达载体的构建 | 第22-31页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·供试毒源、菌株、质粒 | 第22页 |
| ·PCR 引物 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·黄瓜病叶总RNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR 扩增CGMMV CP | 第23页 |
| ·CGMMV CP 目的片段的回收 | 第23-24页 |
| ·目的片段的回收产物与pMD18-T 克隆载体连接 | 第24页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第24-25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·pDBLeu 酵母表达载体的改造 | 第26-27页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·CGMMV CP 基因的PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·重组克隆载体的鉴定 | 第28页 |
| ·阳性克隆的测序鉴定 | 第28页 |
| ·p DBLeu 酵母表达载体的酶切回收 | 第28-29页 |
| ·重组酵母表达载体的鉴定 | 第29-30页 |
| ·小结与讨论 | 第30-31页 |
| 3 利用酵母双杂交技术筛选烟草cDNA 文库 | 第31-42页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·菌株、质粒 | 第31页 |
| ·PCR 引物 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·MaV203 感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·重组质粒转化酵母菌MaV203 | 第32页 |
| ·3AT 浓度的测定 | 第32页 |
| ·含有诱饵质粒pDB-CP 的酵母感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·烟草cDNA 文库的筛选 | 第32-33页 |
| ·X-Gal 活性检测 | 第33页 |
| ·阳性克隆酵母质粒的提取 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆中文库质粒插入片段的克隆 | 第34页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第34页 |
| ·互作蛋白全长酵母表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-40页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第35页 |
| ·PCR 鉴定cDNA 插入片段 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第36页 |
| ·互作蛋白全长基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·互作蛋白全长基因酵母表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·互作蛋白全长与CP 的互作验证 | 第38-40页 |
| ·小结与讨论 | 第40-42页 |
| 4 CGMMV 与烟草蛋白互作的进一步验证 | 第42-54页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·载体质粒和菌株 | 第42页 |
| ·PCR 引物 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·CP，RPL14 基因的扩增 | 第43页 |
| ·扩增产物的电泳检测和回收 | 第43页 |
| ·表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·农杆菌EHA105 感受态的制备 | 第44页 |
| ·重组质粒转化农杆菌EHA105 | 第44页 |
| ·含有重组质粒的农杆菌EHA105 的鉴定 | 第44页 |
| ·含有重组质粒的农杆菌注射本氏烟及瞬时表达 | 第44-45页 |
| ·本氏烟烟草叶片总蛋白的提取及免疫共沉淀分析 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE 电泳及Western blot 检测 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·表达载体的构建 | 第46-49页 |
| ·含有重组质粒的农杆菌EHA105 的鉴定 | 第49-50页 |
| ·双分子荧光互补技术验证互作 | 第50页 |
| ·免疫共沉淀验证CP 与RPL14 间的互作 | 第50-51页 |
| ·互作蛋白的定位 | 第51-52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-54页 |
| 5. 全文总结和展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录1 载体图谱 | 第60-64页 |
| 附录2 所用主要试剂与缓冲液的配制 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
