| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-16页 |
| 1.1 引言 | 第7页 |
| 1.2 内含肽概述 | 第7-10页 |
| 1.2.1 内含肽及其结构 | 第7-8页 |
| 1.2.2 内含肽的自我剪接机制 | 第8-9页 |
| 1.2.3 内含肽的应用 | 第9-10页 |
| 1.3 内含肽亲和纯化系统的发展 | 第10-11页 |
| 1.3.1 前期——连续内含肽时期 | 第10-11页 |
| 1.3.2 近期——断裂内含肽时期 | 第11页 |
| 1.4 对内含肽断裂反应的控制 | 第11-14页 |
| 1.4.1 内含肽序列的改造 | 第12-13页 |
| 1.4.2 空间位阻对断裂反应的作用 | 第13页 |
| 1.4.3 Zn~(2+)对断裂反应的抑制 | 第13-14页 |
| 1.5 本论文立题意义及研究内容 | 第14-16页 |
| 1.5.1 立题意义 | 第14-15页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-28页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.1 试剂 | 第16页 |
| 2.1.2 酶和菌株 | 第16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 重组菌的构建 | 第17-22页 |
| 2.2.1 亲和纯化系统的结构设计及引物设计 | 第17-20页 |
| 2.2.2 亲和配基片段重组质粒pET-28a-n1及p ET-21a- (n2, n3)的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.3 融合蛋白表达片段重组质粒pET-28a-cg1及pET-21a-cg2的构建 | 第21-22页 |
| 2.3 内含肽亲和纯化体系的表达与纯化 | 第22-23页 |
| 2.3.1 N和CG片段的表达与验证 | 第22-23页 |
| 2.3.2 N和CG片段的纯化 | 第23页 |
| 2.4 非介质条件下N和CG片段的断裂活性实验 | 第23-25页 |
| 2.4.1 不同N与CG片段组合的断裂反应 | 第23-24页 |
| 2.4.2 Zn~(2+)对不同组合断裂反应的抑制作用 | 第24-25页 |
| 2.5 Npu DnaE亲和层析纯化体系的构建及其纯化效果研究 | 第25-28页 |
| 2.5.1 共价固定化亲和配基片段N制备亲和层析介质 | 第25-26页 |
| 2.5.2 亲和层析介质对融合蛋白表达片段CG的纯化性能评价 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-47页 |
| 3.1 重组菌的构建 | 第28-32页 |
| 3.1.1 亲和配基片段重组质粒pET-28a-n1及p ET-21a- (n2, n3)的构建 | 第28-30页 |
| 3.1.2 融合蛋白表达片段重组质粒pET-28a-cg1及pET-21a-cg2的构建 | 第30-32页 |
| 3.1.3 小结 | 第32页 |
| 3.2 内含肽亲和纯化体系的表达和纯化 | 第32-36页 |
| 3.2.1 N和CG片段的表达与验证 | 第32-34页 |
| 3.2.2 N和CG片段的分离纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.3 小结 | 第35-36页 |
| 3.3 非介质条件下N和CG片段的断裂活性实验 | 第36-42页 |
| 3.3.1 DTT诱导下不同组合的断裂反应 | 第36-39页 |
| 3.3.2 Zn~(2+)对断裂反应的抑制作用 | 第39-41页 |
| 3.3.3 断裂反应与亲和纯化过程契合度评价 | 第41-42页 |
| 3.3.4 小结 | 第42页 |
| 3.4 Npu DnaE亲和层析纯化体系的构建及其纯化效果研究 | 第42-47页 |
| 3.4.1 共价固定化亲和配基片段N制备亲和层析介质 | 第42-43页 |
| 3.4.2 亲和层析介质对融合蛋白表达片段CG的纯化性能评价 | 第43-46页 |
| 3.4.3 小结 | 第46-47页 |
| 主要结论与展望 | 第47-49页 |
| 主要结论 | 第47-48页 |
| 展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
