| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 注释说明清单 | 第13-17页 |
| 引言 | 第17-22页 |
| 第一部分 Derp1/Derp2T表位融合肽基因的合成及原核表达载体的构建、表达和纯化 | 第22-49页 |
| 1 研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-33页 |
| ·重组基因 | 第23-24页 |
| ·质粒与引物 | 第24页 |
| ·质粒 | 第24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-33页 |
| 3 实验步骤 | 第33-41页 |
| ·重组质粒的提取 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-T_(1-8)的双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·转化 | 第34-35页 |
| ·pET28a(+)-T_(1-8)菌落PCR、筛选阳性菌及测序 | 第35-36页 |
| ·T_(1-8)融合肽的小剂量诱导表达 | 第36页 |
| ·T_(1-8)融合肽的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·T_(1-8)融合肽的大剂量诱导表达 | 第37页 |
| ·T_(1-8)融合肽的纯化 | 第37-38页 |
| ·纯化产物的免疫印记(western blot)分析 | 第38-39页 |
| ·改良型Bradford's法定量重组变应原T1-8融合肽浓度 | 第39-41页 |
| 4 结果 | 第41-47页 |
| ·质粒pET-28a(+)-T_(1-8)的双酶切鉴定 | 第43页 |
| ·PCR扩增筛选阳性转化子并测序 | 第43-44页 |
| ·T_(1-8)融合肽小剂量诱导表达 | 第44-45页 |
| ·T_(1-8)融合肽大剂量诱导表达和纯化 | 第45-46页 |
| ·纯化产物的免疫印迹(western blot)鉴定 | 第46页 |
| ·T_(1-8)融合肽浓度测定 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-49页 |
| 第二部分 T_(1-8)融合肽疫苗对哮喘小鼠免疫治疗的效果分析 | 第49-65页 |
| 1 研究内容 | 第49-50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-52页 |
| ·实验动物 | 第50页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要试剂配制 | 第50-52页 |
| 3 实验步骤 | 第52-55页 |
| ·尘螨粗提取液的制备 | 第52页 |
| ·实验动物分组 | 第52页 |
| ·小鼠哮喘模型的建立 | 第52页 |
| ·对哮喘小鼠进行特异性免疫治疗 | 第52-53页 |
| ·实验标本取材及指标检测 | 第53-55页 |
| ·支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集和检测 | 第53页 |
| ·血清特异性IgE、IgG_1和IgG_(2a)抗体含量的测定 | 第53页 |
| ·脾细胞培养 | 第53-54页 |
| ·肺组织病理切片HE染色 | 第54-55页 |
| 4 结果 | 第55-63页 |
| ·尘螨粗提取液浓度的测定 | 第55页 |
| ·各组小鼠症状和体征的改变 | 第55页 |
| ·ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中特异性细胞因子IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的水平 | 第55-57页 |
| ·ELISA法测定血清中特异性IgE、IgG_1和IgG_(2a)的含量 | 第57-59页 |
| ·ELISA法测定脾细胞培养上清(SSCC)抗原特异性IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的水平 | 第59-61页 |
| ·肺组织切片HE染色 | 第61-63页 |
| 5 讨论 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 | 第75页 |
