| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| ·病毒的特性 | 第10-12页 |
| ·病毒的分类地位 | 第10-11页 |
| ·病毒的理化特征 | 第11-12页 |
| ·病毒的生物型 | 第12页 |
| ·BVDV 的基因组及其功能 | 第12-15页 |
| ·BVDV 的结构蛋白 | 第12-13页 |
| ·BVDV 的非结构蛋白 | 第13-14页 |
| ·BVDV 的非编码结构 | 第14-15页 |
| ·BVDV 的临床特征 | 第15-16页 |
| ·急性临床症状及粘膜病 | 第15页 |
| ·持续性感染 | 第15-16页 |
| ·自然感染与自愈 | 第16页 |
| ·BVDV 的预防及检测 | 第16-17页 |
| ·BVDV 的疫苗 | 第16页 |
| ·BVDV 的检测 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-30页 |
| ·材料 | 第18-21页 |
| ·病毒与细胞 | 第18页 |
| ·质粒与菌株 | 第18页 |
| ·实验用血清 | 第18页 |
| ·常用生物学试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·Oligo 片段合成 | 第19页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第19-21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·NS3 基因的RT-PCR 扩增与表达载体的构建 | 第21-23页 |
| ·瘟病毒属基因差异性分析及基于BVDV NS3 基因的进化树的构建 | 第23页 |
| ·NS3 基因片段的RT-PCR/PCR 扩增与表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·NS3 基因片段的人工合成及表达载体构建 | 第25-26页 |
| ·蛋白的原核表达和鉴定 | 第26-27页 |
| ·原核表达蛋白的切胶纯化 | 第27页 |
| ·原核表达蛋白的亲和层析纯化 | 第27-28页 |
| ·蛋白纯化产物的western-blot 验证 | 第28-29页 |
| ·蛋白纯化产物的western-blot 分析 | 第29页 |
| ·目标蛋白的ELISA 分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-38页 |
| ·pET-30a(+)-NS3 重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·分段表达载体的测序结果 | 第30页 |
| ·pET-30a(+)-NS3 重组质粒表达及纯化结果 | 第30-31页 |
| ·瘟病毒属基因差异性分析 | 第31页 |
| ·进化树的构建 | 第31-32页 |
| ·分段蛋白纯化表达结果 | 第32-33页 |
| ·表达纯化蛋白的western-blot 鉴定 | 第33-34页 |
| ·表达纯化蛋白的western-blot 分析 | 第34-36页 |
| ·目标蛋白的ELISA 分析 | 第36页 |
| ·目标蛋白序列与瘟病毒属病毒序列的比对分析结果 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| ·NS3 全长蛋白的原核表达 | 第38页 |
| ·NS3 蛋白的关键地位 | 第38页 |
| ·基于NS3 核酸序列的进化树的构建 | 第38页 |
| ·普通片段克隆策略 | 第38-39页 |
| ·小于 60bp 片段的克隆策略 | 第39页 |
| ·蛋白纯化方案的选择 | 第39页 |
| ·表位的筛选 | 第39页 |
| ·表位的预测 | 第39-40页 |
| ·选择NS3 作为线性表位筛选对象的依据 | 第40-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附件1 | 第47-52页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第52页 |
