| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-16页 |
| ·本课题研究意义 | 第10-11页 |
| ·国内外研究概况 | 第11-15页 |
| ·赤霉酸-诱导的转录家族基因的研究现状 | 第11-13页 |
| ·CXXC motif的研究现状 | 第13-15页 |
| ·本课题研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 pET28a-GcGASA重组质粒和突变体的构建 | 第16-26页 |
| ·实验材料 | 第16-18页 |
| ·菌株和载体 | 第16页 |
| ·主要仪器和设备 | 第16-17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要溶液及配制 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| ·目标片段的PCR扩增结果 | 第18-20页 |
| ·突变质粒的构建 | 第20-22页 |
| ·实验结果 | 第22-24页 |
| ·重组质粒pET28a-gcgasa的PCR鉴定 | 第22-23页 |
| ·定点突变结果 | 第23-24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 pET28a-GcGASA野生型和突变体的诱导表达、可溶性表达条件的优化以及可溶性蛋白的纯化 | 第26-37页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第26-28页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·试剂配制 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·诱导表达 | 第28页 |
| ·表达菌体的超声破碎 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE对表达蛋白的可溶性鉴定 | 第29页 |
| ·可溶性表达条件的优化 | 第29-30页 |
| ·融合蛋白的纯化和脱盐 | 第30-31页 |
| ·实验结果 | 第31-34页 |
| ·重组质粒pET28a-GcGASA和突变体SS-GcGASA的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·pET28a-GcGASA和突变体可溶性表达条件的优化 | 第32-33页 |
| ·pET28a-GcGASA和突变体SS-GcGASA的纯化 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-37页 |
| 第四章 pET28a-GcGASA野生型和突变体表达包涵体的溶解、氧化重折叠以及HPLC对其成分的分析 | 第37-47页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第37-38页 |
| ·实验仪器 | 第37页 |
| ·主要试剂及配制 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-42页 |
| ·野生型和突变性重组蛋白的诱导表达 | 第38页 |
| ·野生型和突变性重组蛋白包涵体的变性复性氧化重折叠 | 第38-40页 |
| ·氧化重折叠后蛋白的纯化及SDS-PAGE检测重组蛋白的纯度 | 第40页 |
| ·考马斯亮蓝G-250法测定融合蛋白的浓度 | 第40-41页 |
| ·HPLC对野生型和突变型氧化重折叠后蛋白成分的检测 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-45页 |
| ·野生型和突变性重组蛋白包涵体氧化重折叠 | 第42页 |
| ·野生型和突变性包涵体蛋白纯化 | 第42-43页 |
| ·HPLC对野生型和突变型氧化重折叠后蛋白成分的检测 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 pET28a-GcGASA和突变体的抗菌和抗氧化活性的研究 | 第47-58页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第47-48页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·主要试剂及配制 | 第47-48页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·蛋白质浓度定量测定---考马斯亮蓝染色法 | 第48页 |
| ·野生型和突变型蛋白体外清除DPPH自由基 | 第48页 |
| ·野生型和突变型蛋白体外清除过氧化氢 | 第48-49页 |
| ·野生型和突变型蛋白体内清除过氧化氢 | 第49-50页 |
| ·野生型和突变型蛋白抗禾谷镰刀菌活性检测 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-56页 |
| ·融合蛋白pET28a-GcGASA体外清除DPPH | 第51-52页 |
| ·野生型和突变型GcGASA蛋白体外清除过氧化氢 | 第52-53页 |
| ·野生型和突变型GcGASA蛋白体内清除过氧化氢 | 第53-55页 |
| ·野生型和突变型GcGASA蛋白抗禾谷镰刀菌能力 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 结束语 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
