| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 1 绪论 | 第14-24页 |
| ·问题的提出与研究意义 | 第14-17页 |
| ·问题的提出 | 第14-17页 |
| ·研究的意义 | 第17页 |
| ·国内外研究现状 | 第17-20页 |
| ·骨髓间充质干细胞的来源 | 第17页 |
| ·骨髓间充质干细胞的归巢 | 第17-18页 |
| ·骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定 | 第18-19页 |
| ·骨髓间充质干细胞的分化及应用 | 第19-20页 |
| ·本文研究的目的和内容 | 第20-24页 |
| ·本文研究的目的 | 第20页 |
| ·本文的研究内容 | 第20-22页 |
| ·技术路线 | 第22页 |
| ·创新点 | 第22-24页 |
| 2 骨髓间充质干细胞的培养及多向分化潜能的鉴定 | 第24-38页 |
| ·引言 | 第24-25页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·实验细胞 | 第25页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第25页 |
| ·主要实验试剂 | 第25-26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·人骨髓间充质干细胞的培养 | 第27-28页 |
| ·人骨髓间充质干细胞特性分析 | 第28页 |
| ·人骨髓间充质干细胞分化能力的检测 | 第28页 |
| ·RNA 提取与 qPCR | 第28-31页 |
| ·细胞染色 | 第31页 |
| ·数据分析 | 第31页 |
| ·实验结果 | 第31-36页 |
| ·人骨髓间充质干细胞形态观察 | 第31-32页 |
| ·人骨髓间充质干细胞的特性分析 | 第32-36页 |
| ·分析讨论 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 3 聚丙烯酰胺水凝胶的制备及骨髓间充质干细胞在不同硬度基底上的响应研究 | 第38-60页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·实验材料 | 第39-42页 |
| ·实验细胞 | 第39页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第39-40页 |
| ·主要实验试剂 | 第40-41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-53页 |
| ·聚丙烯酰胺水凝胶粘附玻璃基底的处理 | 第42页 |
| ·制备聚丙烯酰胺水凝胶 | 第42-44页 |
| ·原子力显微镜检测聚丙烯酰胺水凝胶硬度 | 第44-47页 |
| ·聚丙烯酰胺水凝胶的表面处理 | 第47-48页 |
| ·聚丙烯酰胺水凝胶上细胞微丝骨架染色 | 第48-49页 |
| ·流式细胞术检测细胞增殖 | 第49-50页 |
| ·测定蛋白表达—Western Blot | 第50-52页 |
| ·数据分析 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-57页 |
| ·不同浓度比例的 Acrylamide/Bis-Acrylamide 凝胶的弹性硬度 | 第53页 |
| ·骨髓间充质干细胞在不同硬度聚丙烯酰胺水凝胶上的形态 | 第53-56页 |
| ·骨髓间充质干细胞在软硬基底上的细胞增殖 | 第56页 |
| ·细胞周期调控蛋白的表达 | 第56-57页 |
| ·分析讨论 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 4 细胞接种密度对软硬基底上骨髓间充质干细胞成骨及软骨分化的影响 | 第60-74页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·实验细胞 | 第61页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第61-62页 |
| ·主要实验试剂 | 第62-63页 |
| ·主要试剂的配制 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-64页 |
| ·RNA 提取与 qPCR | 第63页 |
| ·细胞计数 | 第63页 |
| ·Alcian Blue/PAS 和 Collagen II 免疫荧光染色 | 第63-64页 |
| ·测定蛋白表达—Western Blot | 第64页 |
| ·数据分析 | 第64页 |
| ·实验结果 | 第64-70页 |
| ·不同接种密度在软硬基底上的细胞形态和细胞增殖 | 第64-66页 |
| ·不同接种密度在软硬基底上的成骨分化差异 | 第66-67页 |
| ·不同接种密度在软硬基底上的软骨分化差异 | 第67-70页 |
| ·分析讨论 | 第70-72页 |
| ·本章小结 | 第72-74页 |
| 5 基底硬度诱导骨分化的信号通路 | 第74-92页 |
| ·引言 | 第74-75页 |
| ·实验材料 | 第75-76页 |
| ·实验细胞 | 第75页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第75页 |
| ·主要实验试剂 | 第75-76页 |
| ·主要试剂的配制 | 第76页 |
| ·实验方法 | 第76-79页 |
| ·免疫荧光染色 | 第76-77页 |
| ·蛋白表达的测定—Western Blot | 第77页 |
| ·RNA 提取与 qPCR | 第77页 |
| ·RhoAV14 的转染 | 第77页 |
| ·腺病毒 RasV12, RasN17 制备 | 第77-78页 |
| ·细胞活性的检测 | 第78-79页 |
| ·数据分析 | 第79页 |
| ·实验结果 | 第79-89页 |
| ·转染 RhoAV14 后细胞形态及增殖 | 第79-80页 |
| ·转染 RhoAV14 后成骨标记基因的表达 | 第80-81页 |
| ·Rho 激酶特异性抑制剂 Y-27632 对 MSCs 形态及分化的影响 | 第81-83页 |
| ·不同硬度基底上微管固定剂 Paclitaxel 对 MSCs 形态、增殖、凋亡及分化的影响 | 第83-85页 |
| ·硬基底促进成骨分化过程中 Smad1/5/8，ERK，AKT 的活化 | 第85-87页 |
| ·重组腺病毒 RasV12, RasN17 对 MSCs 在不同硬度基底上的分化影响 | 第87-89页 |
| ·分析讨论 | 第89-91页 |
| ·本章小结 | 第91-92页 |
| 6 结论与展望 | 第92-96页 |
| ·主要结论 | 第92-93页 |
| ·后续工作展望 | 第93-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-112页 |
| 附录 | 第112-114页 |
| A. 作者攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第112-113页 |
| B. 作者攻读博士学位期间发表的会议论文目录 | 第113页 |
| C. 作者攻读博士学位期间取得的科研成果目录 | 第113页 |
| D. 作者在攻读博士学位期间参加的科研项目情况 | 第113-114页 |
