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紫花苜蓿与蒺藜苜蓿盐胁迫应激调控蛋白和miRNA的鉴定分析

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
缩略词第12-13页
1 绪论第13-51页
   ·土壤盐渍化的形成第13页
   ·土壤盐渍化的危害第13-15页
   ·植物在盐胁迫下的应激调控机理第15-25页
     ·植物对盐胁迫的感应机制第15-16页
     ·盐离子在植物体内的运输和分布第16页
     ·Na~+的输入输出以及 K~+/Na~+平衡第16-19页
     ·Na~+的区隔作用第19页
     ·有机渗透调节物第19-21页
     ·LEA 类蛋白与耐盐调控第21-23页
     ·植物在盐胁迫下的氧化应激调控第23-25页
   ·植物在盐胁迫下的细胞信号传导第25-32页
     ·植物在盐胁迫下的钙离子信号传导第25-27页
     ·双元受体激酶与植物盐胁迫信号传导第27-28页
     ·植物在盐胁迫下的 MAPK 信号传导路径第28-30页
     ·ABA 与植物盐胁迫信号传导第30-31页
     ·植物盐胁迫下的 SOS 信号传导路径第31-32页
   ·小 RNA 与植物非生物胁迫应激调控第32-41页
     ·植物小 RNA第32-35页
     ·小 RNA 与植物基因表达调控第35-36页
     ·miRNA 与氧化应激调控第36页
     ·miRNA 与植物 ABA 调控第36-38页
     ·miRNA 与植物干旱胁迫调控第38-39页
     ·miRNA 与植物逆境胁迫下的生长发育调控第39-40页
     ·siRNA 与植物逆境调控第40-41页
   ·植物膜蛋白与逆境调控第41-42页
   ·植物耐盐性状改良研究第42-47页
     ·植物耐盐分子遗传模型第42-44页
     ·基因工程技术在增强植物耐盐性研究中的应用第44-46页
     ·高通量分析技术与植物耐盐性研究第46-47页
   ·苜蓿耐盐性研究进展第47-49页
     ·紫花苜蓿与蒺藜苜蓿第47-48页
     ·苜蓿盐胁迫应激调控机理研究进展第48-49页
   ·本研究的目的、内容及意义第49-51页
2 紫花苜蓿与蒺藜苜蓿根中盐胁迫相关蛋白的鉴定分析第51-81页
   ·材料第51-52页
     ·植物材料第51页
     ·主要试剂第51页
     ·主要仪器第51页
     ·分析软件第51页
     ·主要试剂配方第51-52页
   ·方法第52-59页
     ·植物材料培养、处理及取样第52页
     ·蛋白质提取第52-53页
     ·总 RNA 的提取第53页
     ·蛋白质溶解及定量第53-54页
     ·蛋白质第一向等电聚焦第54-55页
     ·第二向 SDS-PAGE 垂直电泳第55-56页
     ·SDS-PAGE 凝胶染色第56-57页
     ·凝胶扫描及图像分析第57页
     ·蛋白质谱鉴定第57页
     ·反转录及荧光定量 PCR第57-59页
   ·结果与分析第59-78页
     ·实验材料的选择及处理第59-60页
     ·蛋白质双向电泳分析第60页
     ·蛋白凝胶图像分析第60-67页
     ·差异蛋白质谱分析第67页
     ·差异蛋白功能分析第67-78页
     ·转录水平表达分析第78页
   ·讨论第78-79页
   ·小结第79-81页
3 紫花苜蓿与蒺藜苜蓿根中盐胁迫相关 miRNA 的鉴定分析第81-97页
   ·材料第81页
     ·植物材料第81页
     ·主要试剂第81页
     ·主要仪器第81页
     ·分析软件第81页
   ·方法第81-85页
     ·植物材料处理及取样第81页
     ·总 RNA 提取第81页
     ·小 RNA 测序第81-82页
     ·测序数据的基本分析第82页
     ·已知 miRNA 和新 miRNA 的鉴定分析第82页
     ·新 miRNA 及其前体结构预测第82-83页
     ·miRNA 靶标基因预测第83页
     ·miRNA 的差异表达分析第83页
     ·荧光定量 PCR 检测 miRNA 表达量第83-85页
   ·结果与分析第85-95页
     ·高通量测序数据分析第85-87页
     ·已知 miRNA 的分析第87页
     ·新 miRNA 的预测分析第87-89页
     ·miRNA 靶标基因预测分析第89-91页
     ·miRNA 表达量差异分析第91页
     ·miRNA 的荧光定量分析第91-95页
   ·讨论第95页
   ·小结第95-97页
4 紫花苜蓿与蒺藜苜蓿 RCI2 类基因的克隆及功能分析第97-117页
   ·材料第97-99页
     ·生物材料第97页
     ·主要试剂及配方第97页
     ·质粒载体第97页
     ·培养基及配方第97-99页
     ·主要仪器第99页
   ·方法第99-107页
     ·植物材料培养、处理及取样第99页
     ·总 RNA 和基因组 DNA 的提取第99页
     ·引物设计与合成第99-100页
     ·未知基因全长序列克隆第100-103页
     ·序列分析软件及数据库第103页
     ·荧光定量 PCR 分析第103页
     ·相关载体的构建第103-104页
     ·基因枪子弹制备及瞬时表达载体转化第104-105页
     ·酿酒酵母转化第105页
     ·农杆菌转化第105-106页
     ·拟南芥转化第106页
     ·GUS 化学染色第106-107页
     ·叶绿素提取及含量测定第107页
   ·结果与分析第107-116页
     ·MsRCI2A 基因 3’和 5’端序列的克隆第107-108页
     ·MsRCI2A 基因全长序列拼接及序列分析第108-110页
     ·苜蓿 RCI2 类基因表达量分析第110-111页
     ·苜蓿 RCI2 类基因亚细胞定位分析第111-112页
     ·酵母突变体 pmp3 的功能恢复分析第112-113页
     ·转 MsRCI2A 基因拟南芥的鉴定及相关分析第113-116页
   ·讨论第116页
   ·小结第116-117页
5 紫花苜蓿盐诱导基因 MsGRP 的克隆及功能分析第117-129页
   ·材料第117页
     ·生物材料第117页
     ·主要试剂及配方第117页
     ·质粒载体第117页
     ·培养基及配方第117页
     ·主要仪器第117页
   ·方法第117-118页
     ·植物材料培养、处理及取样第117页
     ·总 RNA 及基因组 DNA 的提取第117页
     ·引物设计与合成第117-118页
     ·未知基因全长序列克隆第118页
     ·序列分析软件及数据库第118页
     ·荧光定量 PCR 分析第118页
     ·相关载体的构建第118页
     ·基因枪子弹制备及瞬时表达载体转化第118页
     ·农杆菌转化第118页
     ·拟南芥转化第118页
     ·GUS 化学染色第118页
     ·叶绿素提取及含量测定第118页
   ·结果与分析第118-127页
     ·MsGRP 基因 3’和 5’端序列的克隆第118-119页
     ·MsGRP 基因全长 c DNA 序列拼接及序列分析第119-121页
     ·MsGRP 基因的表达量分析第121-122页
     ·MsGRP 基因亚细胞定位分析第122页
     ·转 MsGRP 基因拟南芥的鉴定及相关分析第122-127页
   ·讨论第127-128页
   ·小结第128-129页
6 结论与展望第129-133页
   ·结论第129-130页
   ·创新点第130页
   ·后续工作展望第130-133页
致谢第133-135页
参考文献第135-155页
附录 作者在攻读学位期间发表论文目录第155页

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