| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-24页 |
| ·研究背景 | 第12-14页 |
| ·药物高通量筛选 (HIGH THROUGHPUT SCREENING, HTS) 研究进展 | 第14-19页 |
| ·细胞标记的药物 HTS ( signal pathway dependent ) | 第16-17页 |
| ·非细胞标记的药物 HTS ( signal pathway independent ) | 第17-18页 |
| ·生物芯片研究进展 | 第18-19页 |
| ·课题的提出 | 第19-24页 |
| 2 人膜蛋白 HSV-1 重组病毒 GB:CD4、GB:GPCR77 的制备 | 第24-58页 |
| ·引言 | 第24-27页 |
| ·试验材料与生化试剂 | 第27-28页 |
| ·试验方法（所有操作均在无菌操作台上进行） | 第28-44页 |
| ·ICD DNA 的提取 | 第28-30页 |
| ·CD4、GPCR77 的 PKΔ4B 质粒克隆 | 第30-33页 |
| ·磷酸钙沉淀共转染法在 A.1.1 细胞内重组 gB:CD4、gB: GPCR77 病毒粒子 | 第33-34页 |
| ·96 孔板有限稀释法纯化病毒 | 第34-35页 |
| ·纯化的病毒粒子放大培养与保存 | 第35-36页 |
| ·病毒滴定 | 第36-37页 |
| ·人膜蛋白表达分析 | 第37-40页 |
| ·CD4、GPCR77 膜蛋白在重组 HSV-1 上的整合分析 | 第40-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-55页 |
| ·CD4 、GPCR77 克隆的 PCR、序列验证 | 第44-47页 |
| ·重组病毒纯化、放大培养及滴定结果 | 第47-50页 |
| ·CD4、GPCR77 膜蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·CD4、GPCR77 在 gB:CD4、gB:GPCR77 上的整合分析 | 第51-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 3 人膜蛋白 HSV-1 重组病毒 GC:CD4、GC:GPCR77 的制备 | 第58-78页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·试验材料与生化试剂 | 第58-59页 |
| ·试验方法 | 第59-71页 |
| ·化学转染 PSC101 质粒进 TOP10 细胞 | 第61-62页 |
| ·同源重组 Rpsl-neo cassette 到 BAC-HSV-1 基因组的 gC 基因 | 第62-64页 |
| ·Rpsl-neo cassette 重组阳性克隆的筛选以及 Rpsl-neo cassette 重组 BAC -HSV-1 基因组的提取 | 第64-65页 |
| ·F1/B1 引物 PCR Rpsl-neo cassette 测序片段, ECOR1 酶切筛选阳性克隆 | 第65-66页 |
| ·CD4-gC 融合基因的 PCR 扩增 | 第66-69页 |
| ·CD4-gC 融合基因同源重组 | 第69页 |
| ·CD4-gC 融合基因阳性克隆的筛选 | 第69-70页 |
| ·Lipofectamin2000TM转染 CD4-gC 重组的 BAC-HSV-1 到 Vero 细胞, 重构 gC: CD4病毒 | 第70-71页 |
| ·gC: CD4 病毒的放大培养与滴定 | 第71页 |
| ·结果与分析 | 第71-76页 |
| ·Rpsl-neo cassette 的扩增与回收 | 第71-72页 |
| ·同源重组 BAC- Rpsl-neo、BAC- gC: CD4 阳性克隆的筛选结果 ( 现象观察，PCR及序列验证 ) | 第72-75页 |
| ·gC: CD4 重组病毒滴定结果 | 第75页 |
| ·gB:CD4、gC: CD4 流失细胞仪检测比较分析 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 4 构建病毒芯片 | 第78-88页 |
| ·引言 | 第78页 |
| ·试验材料与生化试剂 | 第78-79页 |
| ·试验方法 | 第79-80页 |
| ·病毒微阵列的构建 | 第79页 |
| ·探索最佳的芯片病毒加载浓度 | 第79页 |
| ·病毒芯片的抗体试验 | 第79-80页 |
| ·配体 C5a 结合试验 | 第80页 |
| ·凝集素结合试验 | 第80页 |
| ·结果与分析 | 第80-84页 |
| ·最佳芯片病毒加载浓度的确定 | 第80-81页 |
| ·病毒芯片的 anti-gB、anti-gC、anti-gD、anti-VP5 抗体检测 | 第81-82页 |
| ·病毒芯片的 anti-CD4、anti-GPCR77 检测 | 第82页 |
| ·病毒芯片的 C5a-GPCR77 配体检测 | 第82-83页 |
| ·病毒芯片的凝集素检测 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-88页 |
| 5 结论与展望 | 第88-90页 |
| ·本文主要结论及创新点 | 第88页 |
| ·后续工作建议 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 附录 作者发表的论文、著作及专利 | 第98-99页 |
