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水稻OsMBL基因的克隆与分析

摘要第1-6页
Abstract第6-11页
第一章 文献综述第11-24页
 1. 钙离子和钙调素结合蛋白第11-19页
   ·CA~(2+)和CA~(2+)信号第11-12页
   ·钙调素结合蛋白(CAM BINDING PROTEINS,CAMBPs)第12-16页
     ·蛋白激酶第13-14页
     ·转录因子和核蛋白第14页
     ·离子转运体,通道蛋白和膜蛋白第14-16页
   ·CAMBPS的功能第16-19页
     ·CaMBPs对非生物胁迫的应答作用第16-17页
     ·CaMBPs在植物对病原体入侵的作用第17-18页
     ·CaMBPs对植物生长发育的影响第18-19页
 2. 植物凝集素第19-23页
   ·植物凝集素的定义和分类第19-20页
   ·JACALIN-RELATED MANNOSE-BINDING LECTIN家族第20-21页
   ·植物凝集素的功能第21-23页
 3. 本研究的目的和意义第23-24页
第二章 水稻OSMBL基因的克隆与分析第24-34页
 1. 材料与方法第24-29页
   ·植物材料、菌株与质粒第24页
   ·主要仪器第24页
   ·主要试剂及培养基第24-25页
     ·主要试剂第24-25页
     ·主要培养基第25页
   ·实验方法第25-29页
     ·水稻日本晴的处理第25页
     ·RNA的提取与纯化第25-26页
     ·RNA的反转录第26页
     ·OsMBL基因的克隆第26-28页
     ·半定量RT-PCR第28-29页
 2. 结果与分析第29-34页
   ·OSMBL的克隆第29页
   ·OSMBL序列分析第29-31页
     ·核酸序列分析第29-30页
     ·氨基酸序列和蛋白质分析第30-31页
   ·OSMBL的表达分析第31-34页
     ·基于在线数据的OsBML在不同时期水稻器官表达分析第31-32页
     ·不同逆境下的表达第32页
     ·在不同组织中的表达量第32-34页
第三章 OSMBL转基因植株的获得及分析第34-52页
 1. 材料与方法第34-43页
   ·植物材料、菌株和载体第34页
   ·主要试剂和培养基第34-35页
     ·主要试剂第34页
     ·主要培养基第34-35页
   ·主要仪器设备第35页
   ·实验方法第35-43页
     ·pCAMBIA 1300:OsMBL超表达载体以及反向抑制载体的构建第35-37页
     ·pCAMBIA1300:OsMBL-GFP载体的构建第37-38页
     ·pCAMBIA1300:GFP载体的构建第38页
     ·转基因载体转化农杆菌第38-39页
     ·转基因水稻的获得第39-40页
     ·转基因水稻的检测第40页
     ·转基因后代对逆境抗性的初步研究及表型变化第40-41页
     ·水稻原生质体的制备与瞬时转化第41-43页
 2. 结果与分析第43-52页
   ·PCAMBIA1300:OSMBL超表达载体及反向抑制载体的构建第43页
   ·PCAMBIA1300:OsMBL-GFP载体的构建第43-44页
   ·PCAMBIA1300:GFP载体的构建第44页
   ·转基因植株的获得第44-45页
   ·转基因水稻的检测第45-47页
     ·转基因植株的快速检测第45页
     ·转基因水稻的PCR鉴定第45-46页
     ·转基因后代种子的潮霉素发芽鉴定第46-47页
   ·转基因植株抗性及表型研究第47-50页
     ·超表达植株增强了对部分逆境胁迫的抗性第47-50页
     ·反向抑制表达植株的生育期推迟第50页
   ·OsMBL在水稻日本晴原生质体中的亚细胞定位第50-52页
第四章 蛋白质相互作用的验证以及融合蛋白的表达、纯化第52-64页
 1. 材料与方法第52-60页
   ·实验材料、菌株和质粒第52-53页
   ·主要试剂和培养基第53-54页
     ·主要试剂第53页
     ·主要培养基第53-54页
   ·主要仪器第54页
   ·实验方法第54-60页
     ·pGBKT7:OsMBL载体的构建第54页
     ·pGADT7-Rec:OsCaMBP载体的构建第54-55页
     ·含有目的片段载体的转化第55-56页
     ·融合表达载体的构建、表达和纯化第56-59页
     ·双分子荧光互补载体构建第59-60页
 2. 结果与分析第60-64页
   ·酵母双杂交载体的构建及转化第60-61页
     ·pGBKT7:OsMBL载体的构建第60页
     ·pGADT7-Rec:OsCaMBP载体的构建第60页
     ·酵母转化第60-61页
     ·pGBKT7:OsMBL自转录活性和毒性检测第61页
   ·融合表达载体的构建、融合蛋白的表达及纯化第61-62页
     ·pET-32a:OsMBL第61页
     ·pGEX-4T-2:OsCaMBP第61-62页
     ·融合蛋白的表达以及纯化第62页
   ·双分子荧光互补载体的构建第62-64页
     ·pSAT1-cCFP-C:OsMBL载体的构建第62-63页
     ·pSAT1-cCFP-N:OsCaMBP载体的构建第63-64页
第五章 总结与讨论第64-67页
参考文献第67-72页
致谢第72页

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