| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| ·绪论 | 第13-14页 |
| ·结核分枝杆菌enoyl-CoA hydratase 基因分析 | 第14-15页 |
| ·echA18 编码蛋白的结构与保守性分析 | 第15-16页 |
| ·物种间enoyl-CoA hydratase 同源性及基因系统进化分析 | 第16-17页 |
| ·烯酰-CoA 水合酶同源物在医学领域的研究 | 第17-20页 |
| 第二章 实验设计方案与生物信息学分析 | 第20-31页 |
| ·实验意义和目的 | 第20页 |
| ·研究内容 | 第20-21页 |
| ·实验流程图 | 第21-22页 |
| ·生物信息学分析 | 第22-31页 |
| ·生物信息学工具 | 第22-23页 |
| ·分析过程与结果 | 第23-28页 |
| ·讨论 | 第28-31页 |
| 第三章 家蚕膜蛋白BmP（echA）-like 基因的克隆 | 第31-49页 |
| ·材料与试剂 | 第31-33页 |
| ·材料与设备 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·主要试剂的配制 | 第31-33页 |
| ·方法 | 第33-41页 |
| ·重组克隆载体pBacPAK 8-Polh-BmP(echA)-like 质粒的构建策略 | 第33页 |
| ·引物设计合成与PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物与质粒pBacPAK 8-Polh 的双酶切 | 第35页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第35页 |
| ·连接反应 | 第35-36页 |
| ·重组 pBacPAK 8-Polh-BmP(echA)-like 目的片段 PCR 扩增及回收 | 第36页 |
| ·目的片段与PTZ57R/T 载体连接并酶切 | 第36-37页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第37-38页 |
| ·E.coli TG1、BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组杆状病毒的构建与鉴定 | 第39-41页 |
| ·BmP(echA)-like 基因序列测序 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-47页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第42-43页 |
| ·重组 pBacPAK 8-Polh-BmP(echA)-like 的鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组PTZ57R/T 载体的鉴定 | 第44页 |
| ·重组pET-32a 质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组pFastBac HTb 质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组Bacmid 的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 重组融合蛋白的原核表达及纯化 | 第49-62页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·试剂的配制 | 第49-52页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE 用试剂 | 第50-51页 |
| ·PBS(pH7.4)缓冲液的配制: | 第51页 |
| ·Western blotting 检测用试剂 | 第51页 |
| ·处理包涵体的试剂 | 第51页 |
| ·镍柱亲和层析纯化所用试剂 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-56页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第52-54页 |
| ·融合蛋白pH 梯度洗脱纯化 | 第54页 |
| ·融合蛋白的亲和层析纯化预处理步骤 | 第54-55页 |
| ·Ni-NTA 柱亲和层析纯化重组蛋白 | 第55页 |
| ·Western blotting 检测 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白TEV 酶切消化 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白与非融合蛋白在大肠杆菌表达系统中的表达比较 | 第57-58页 |
| ·融合蛋白pH 调节纯化结果 | 第58页 |
| ·亲和层析纯化融合蛋白 | 第58-59页 |
| ·融合蛋白的Western blotting 检测结果 | 第59-60页 |
| ·融合蛋白TEV 酶切结果 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 重组融合蛋白的真核表达鉴定 | 第62-66页 |
| ·材料与试剂 | 第62-63页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·试剂与设备 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63-64页 |
| ·重组病毒vBm-Polh- BmP(echA)-like 与vBm-BmP(echA)-like 的构建 | 第63页 |
| ·重组病毒的PCR 鉴定 | 第63页 |
| ·重组病毒vBm-Polh-BmP(echA)-like 与vBm-BmP(echA)-like 感染家蚕BmN 细胞 | 第63页 |
| ·重组病毒的表达鉴定 | 第63-64页 |
| ·结果 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白在家蚕细胞中表达的SDS-PAGE 电泳检测 | 第64页 |
| ·重组蛋白在家蚕细胞中表达的Western blotting 检测 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 BmP(echA)-like 基因在家蚕组织中的表达差异性分析 | 第66-73页 |
| ·材料与试剂 | 第66页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·试剂的配制 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-69页 |
| ·总RNA 的提取 | 第66-67页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第67页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第67-68页 |
| ·荧光定量PCR | 第68页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-72页 |
| ·家蚕各组织中内参与BmP(echA)-like 的RT-PCR 曲线分析 | 第69-70页 |
| ·家蚕各组织中BmP(echA)-like 的转录表达水平分析 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 第七章 重组蛋白的相互作用蛋白分析 | 第73-81页 |
| ·材料与试剂 | 第73-75页 |
| ·材料 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·试剂的配制 | 第73-75页 |
| ·方法 | 第75-78页 |
| ·重组蛋白Polh-BmP(echA)-like 的制备 | 第75-76页 |
| ·BmN 细胞总蛋白的制备 | 第76页 |
| ·His-Pull down | 第76页 |
| ·双向电泳分析 | 第76-78页 |
| ·结果和分析 | 第78-80页 |
| ·Polh-BmP(echA)-like 互作蛋白的SDS-PAGE 结果分析 | 第78页 |
| ·Polh-BmP(echA)-like 互作蛋白的双向电泳结果 | 第78-80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| 总结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
