| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·前列腺癌背景介绍 | 第11-12页 |
| ·RTK 信号通路与鸟嘌呤核苷酸交换因子简介 | 第12-14页 |
| ·酪氨酸激酶受体Eph 亚族的研究进展 | 第14-18页 |
| ·SGEF/CSGEF 基因背景介绍 | 第18-19页 |
| ·前列腺癌肿瘤标志物研究的现状 | 第19页 |
| ·本研究的方向和重点 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-29页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·引物合成及序列测定 | 第20页 |
| ·菌株、细胞株和质粒 | 第20页 |
| ·细胞培养和转染试剂 | 第20页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第20页 |
| ·常用分子生物学试剂盒 | 第20-21页 |
| ·免疫学常用试剂 | 第21页 |
| ·其他常规试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-29页 |
| ·感受态的制备，质粒转化和提取 | 第21-22页 |
| ·质粒构建 | 第22-23页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第23页 |
| ·反转录PCR | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第24-25页 |
| ·细胞培养 | 第25-26页 |
| ·细胞转染 | 第26页 |
| ·稳定细胞克隆的筛选 | 第26页 |
| ·细胞蛋白的提取 | 第26-27页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| ·western 印记分析 | 第27页 |
| ·MTT 实验 | 第27-28页 |
| ·软琼脂集落形成实验 | 第28页 |
| ·平板克隆实验 | 第28页 |
| ·裸鼠成瘤实验 | 第28页 |
| ·数据分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-40页 |
| ·稳定表达外源EphA3 基因小鼠成纤维细胞模型的建立与功能分析 | 第29-31页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1(-)/myc-his-EphA3 的构建 | 第29-30页 |
| ·稳定表达外源EphA3 基因的小鼠成纤维细胞株的建立 | 第30页 |
| ·EphA3 基因表达对NIH3T3 细胞的生长无显著影响 | 第30页 |
| ·EphA3 基因表达致使NIH3T3 细胞产生锚着非依赖性生长能力 | 第30-31页 |
| ·稳定表达外源 EphA3 基因的前列腺癌 LNCaP 细胞模型的建立与功能分析 | 第31-38页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1 -EphA3-IRES-PC-1 的构建 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-33页 |
| ·瞬时转染 | 第33页 |
| ·鉴定细胞克隆 | 第33-34页 |
| ·EphA3、PC-1 表达促进前列腺癌细胞克隆形成能力和锚着非依赖生长能 力 | 第34-38页 |
| ·SGEF 区段融合载体的构建和表达 | 第38-40页 |
| ·SGEF 区段载体的构建 | 第39页 |
| ·IPTG 诱导pGEX-KG-SGEF 区段融合载体的表达 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 全文结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 缩略词表 | 第48-49页 |
| 附录一 | 第49-51页 |
| 附录二 | 第51-52页 |
| 附录三 | 第52-55页 |
| 附录四 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
