| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-24页 |
| ·引言 | 第9-10页 |
| ·肿瘤坏死因子(TNF)概述 | 第10-11页 |
| ·TNF的结构及生物学功能 | 第10-11页 |
| ·TNF临床研究现状 | 第11页 |
| ·重组人TNF-α在大肠杆菌中的表达 | 第11-15页 |
| ·用大肠杆菌进行基因重组蛋白表达的一般策略 | 第12-14页 |
| ·重组人TNF-α在大肠杆菌中表达研究现状 | 第14-15页 |
| ·液相色谱法制备基因重组蛋白 | 第15-18页 |
| ·基因重组蛋白粗体产物的获得 | 第15页 |
| ·蛋白折叠液相色谱法在重组蛋白复性与同时纯化中的应用 | 第15-18页 |
| ·TNF-α的分离纯化 | 第18页 |
| 参考文献 | 第18-24页 |
| 第二章 大肠杆菌生产rhTNF-α的摇瓶发酵工艺研究 | 第24-42页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·仪器试剂 | 第24-25页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·试剂配制 | 第25-26页 |
| ·固体LB培养基的配制 | 第25页 |
| ·液体培养基的配制 | 第25-26页 |
| ·其它溶液的配制 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·菌种的培养 | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳的操作 | 第27-29页 |
| ·结果测定 | 第29-30页 |
| ·培养条件的优化 | 第30-35页 |
| ·培养基种类对rhTNF-α表达的影响 | 第30页 |
| ·单一培养温度对E.coli生长的影响 | 第30-32页 |
| ·诱导时机对E.coli生长和rhTNF-α表达的影响 | 第32-33页 |
| ·诱导维持时间对E.coli生长和rhTNF-α表达的影响 | 第33-34页 |
| ·pH值对E.coli生长和rhTNF-α表达的影响 | 第34-35页 |
| ·接种量对E.coli生长和rhTNF-α表达的影响 | 第35页 |
| ·对筛选出的M9培养基组成成分的优化 | 第35-40页 |
| ·碳源种类的选择 | 第35-36页 |
| ·培养基中碳源和氮源配比的优化 | 第36-38页 |
| ·镁离子含量的优化 | 第38-39页 |
| ·优化条件下大肠杆菌的生长和rhTNF-α的表达情况 | 第39-40页 |
| ·结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-42页 |
| 第三章 疏水色谱法对rhTNF-α的复性并同时纯化 | 第42-53页 |
| ·引言 | 第42-43页 |
| ·HPHIC复性与同时纯化机理 | 第42-43页 |
| ·影响HPHIC复性与同时纯化的因素 | 第43页 |
| ·实验部分 | 第43-45页 |
| ·仪器和设备 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·rhTNF-α包涵体的洗涤、破碎与抽提 | 第43-44页 |
| ·考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量 | 第44-45页 |
| ·rhTNF-α活性的测定 | 第45页 |
| ·疏水色谱法对rhTNF-α粗提物的复性和纯化 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-51页 |
| ·不同抽提液对rhTNF-α分离的影响 | 第45-46页 |
| ·固定相的影响 | 第46-47页 |
| ·流动相pH值的影响 | 第47-48页 |
| ·流动相中GSH/GSSG的比例对rhTNF-α复性和纯化的影响 | 第48-49页 |
| ·流动相中添加不同浓度的脲对rhTNF-α复性和纯化的影响 | 第49-50页 |
| ·优化条件后rhTNF-α的SDS-PAGE电泳图和质量回收率 | 第50页 |
| ·HPHIC复性过程中rhTNF-α的质量损失 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第四章 离子交换色谱对rhTNF-α的复性并同时纯化 | 第53-62页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验部分 | 第53-54页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·rhTNF-α包涵体的洗涤、破碎、抽提 | 第54页 |
| ·Bradford法测定蛋白含量 | 第54页 |
| ·rhTNF-α活性的测定 | 第54页 |
| ·离子交换色谱法对rhTNF-α粗提物的复性和纯化 | 第54页 |
| ·结果和讨论 | 第54-59页 |
| ·流动相pH值的影响 | 第54-56页 |
| ·流动相中GSH/GSSG对rhTNF-α复性和纯化的影响 | 第56-57页 |
| ·流动相中加不同浓度脲对rhTNF-α复性和纯化的影响 | 第57-59页 |
| ·rhTNF-α的纯度和质量回收率 | 第59页 |
| ·HIC、IEC和稀释法复性的比较 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 硕士期间发表论文 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
