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不同宿主来源日本血吸虫童虫差异表达基因的研究

摘要第1-10页
Abstract第10-21页
第一章 绪论第21-32页
   ·前言第21页
   ·东方田鼠抗血吸虫的研究第21-24页
     ·东方田鼠抗日本血吸虫病现象第22页
     ·日本血吸虫在东方田鼠体内的发育及宿主炎症反应第22页
     ·东方田鼠抗日本血吸虫特异性免疫机制研究第22-24页
       ·东方田鼠抗日本血吸虫体液免疫机制研究第22-23页
       ·东方田鼠抗日本血吸虫的细胞免疫机制研究第23页
       ·东方田鼠抗日本血吸虫非特异性免疫机制研究第23页
       ·东方田鼠抗日本血吸虫其他可能机制研究第23-24页
   ·血吸虫疫苗的研究第24-28页
     ·血吸虫疫苗的种类第24-25页
     ·血吸虫研究的保护性抗原介绍第25-28页
   ·基因芯片技术在寄生虫学中的应用第28-32页
     ·基因芯片的定义第28页
     ·基因芯片的制备第28-29页
     ·基因芯片技术在寄生虫学中的应用第29-32页
第二章 不同宿主来源日本血吸虫 10d 童虫形态观察和体细胞凋亡研究第32-39页
   ·绪言第32页
   ·材料和方法第32-33页
     ·试验动物第32页
     ·主要仪器第32页
     ·主要试剂第32页
     ·虫体收集第32-33页
     ·扫描电镜观察不同宿主来源10d 童虫的形态第33页
     ·透射电镜观察不同宿主来源10d 童虫的形态第33页
     ·Annexin V-FITC/propidium iodide (PI)法检测不同宿主来源虫体细胞细胞凋亡第33页
   ·结果第33-37页
     ·扫描电镜分析不同宿主来源10d 童虫的形态第33-36页
     ·透射电镜分析不同宿主来源10d 童虫的形态第36-37页
     ·不同宿主来源虫体细胞细胞凋亡分析第37页
   ·讨论第37-39页
第三章 不同宿主来源日本血吸虫童虫基因表达的芯片分析第39-58页
   ·绪言第39页
   ·材料和方法第39-43页
     ·试验动物第39页
     ·主要仪器第39页
     ·主要试剂第39-40页
     ·虫体收集第40页
     ·寡核苷酸芯片的定制与杂交第40-41页
     ·芯片结果的实时定量PCR 验证第41-43页
   ·结果第43-55页
     ·虫体总RNA 的提取第43页
     ·不同宿主来源童虫差异表达基因分析第43-51页
     ·芯片结果Real time RT-PCR 验证第51-55页
   ·讨论第55-58页
第四章日本血吸虫细胞凋亡因子和凋亡抑制因子 SjIAP 研究第58-74页
   ·绪言第58页
   ·材料和方法第58-63页
     ·主要试剂和酶第58页
     ·菌种、实验动物和血清第58-59页
     ·RNA 的提取第59页
     ·不同宿主来源童虫caspase3/7 活性检测第59页
     ·IAP 基因的扩增及生物信息学分析第59页
     ·荧光实时定量RT-PCR 检测第59-60页
     ·重组表达质粒的构建与表达第60页
     ·Western blotting 检测第60-61页
     ·重组蛋白质谱鉴定第61页
     ·IAP 质粒转染对ActD 药物诱导凋亡的抑制作用第61-62页
     ·免疫组化第62页
     ·虫体蛋白与重组IAP 蛋白相互作用第62-63页
   ·结果第63-72页
     ·不同宿主来源童虫caspase3/7 活性分析第63页
     ·不同宿主来源虫体caspase3 和caspase7 实时定量分析第63-64页
     ·Sj IAP 基因的克隆及生物信息学分析第64-66页
     ·重组原核表达质粒的构建、原核表达及重组蛋白纯化第66-68页
     ·Sj IAP 基因的期别差异表达分析第68-69页
     ·Sj IAP 在293T 细胞中对caspase 活性的抑制作用第69-70页
     ·Sj IAP 重组蛋白对血吸虫caspase 活性影响的研究第70页
     ·Sj IAP 的免疫定位研究第70-71页
     ·Sj IAP 在不同宿主来源童虫中的表达差异第71-72页
   ·讨论第72-74页
第五章 日本血吸虫甲硫氨酰氨肽酶2基因(MAP 2)和mago nashi基因的研究第74-90页
   ·绪言第74页
   ·材料和方法第74-77页
     ·主要试剂和酶第74页
     ·菌种、实验动物和血清第74-75页
     ·RNA 的提取第75页
     ·cDNA 片段的扩增及生物信息学分析第75页
     ·荧光实时定量RT-PCR 检测第75-76页
     ·重组表达质粒的构建与表达第76页
     ·Sj MAP2 和Sj mago nashi 基因在不同宿主来源童虫的基因和蛋白表达情况第76页
     ·吡喹酮作用对SjMAP2 基因表达影响第76-77页
     ·小鼠免疫保护性试验第77页
   ·结果第77-87页
     ·Sj MAP 2 和Sj mago nashi 基因的克隆及生物信息学分析第77-80页
     ·重组表达质粒的构建与原核表达、重组蛋白纯化第80-82页
     ·Sj MAP2 和Sj mago nashi 基因的期别差异表达分析第82-83页
     ·Sj MAP2 和Sj mago nashi 在不同宿主来源童虫中的表达差异第83-85页
     ·吡喹酮作用对血吸虫Sj MAP2 基因表达影响第85-86页
     ·动物免疫试验结果第86页
     ·血清特异性抗体水平第86-87页
   ·讨论第87-90页
第六章 日本血吸虫Cyclophilin 家族基因的研究第90-107页
   ·绪言第90页
   ·材料和方法第90-93页
     ·主要试剂和酶第90页
     ·菌种、实验动物和血清第90-91页
     ·RNA 的提取第91页
     ·含ORF cDNA 片段和基因组序列的扩增及生物信息学分析第91页
     ·荧光实时定量RT-PCR 检测第91-92页
     ·重组表达质粒的构建与表达第92页
     ·复性后重组蛋白CyPA 的PPIase 酶活性测定第92页
     ·Cyclosporin A 作用日本血吸虫后Sj CyPA 基因的表达检测第92-93页
     ·小鼠免疫保护性试验第93页
   ·结果第93-105页
     ·SjCyPA、CyPB 和CyPC 基因的克隆及生物信息学分析第93-95页
     ·SjCyPA、CyPB 和CyPC 基因的期别差异表达分析第95-97页
     ·Sj CyPA、CyPB 和CyPC 重组蛋白的表达纯化第97-99页
     ·表达产物抗原性分析第99-100页
     ·重组复性蛋白 CyPA 的 PPIase 酶活性测定第100-101页
     ·Cyclosporin A 作用后 CyPA 基因的表达检测第101-102页
     ·动物免疫试验结果第102-103页
     ·血清抗体水平第103-105页
   ·讨论第105-107页
第七章 全文结论第107-108页
参考文献第108-115页
致谢第115-116页
作者简历第116-117页

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