| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-22页 |
| ·乳糖酶的简介 | 第11-14页 |
| ·研究背景 | 第11页 |
| ·乳糖酶的来源与性质 | 第11-13页 |
| ·乳糖酶国内外研究现状 | 第13-14页 |
| ·酶的热稳定机制和分子改造策略研究进展 | 第14-21页 |
| ·酶热稳定性的概念 | 第15页 |
| ·影响酶热稳定性的因素 | 第15-18页 |
| ·提高蛋白质热稳定性的策略 | 第18-21页 |
| 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 提高乳糖酶热稳定性突变位点的预测与设计 | 第22-51页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·菌种与载体 | 第22页 |
| ·工具酶 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第22-24页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·研究方法 | 第25-36页 |
| ·乳糖酶LACH 的同源建模 | 第25页 |
| ·乳糖酶LACH 的分子动力学曲线模拟 | 第25页 |
| ·突变位点以及突变氨基酸的确定 | 第25页 |
| ·突变方法 | 第25-27页 |
| ·pPIC9-H’表达载体（H’指任意突变酶基因）的构建 | 第27-28页 |
| ·含 pPIC9-H’表达载体克隆子的筛选 | 第28-29页 |
| ·重组乳糖酶的表达及纯化 | 第29-31页 |
| ·乳糖酶活性的测定 | 第31-33页 |
| ·酶学性质的分析与比较 | 第33-36页 |
| ·结果 | 第36-48页 |
| ·乳糖酶的同源建模 | 第36页 |
| ·乳糖酶LACH 分子动力学曲线的测定及突变位点的确定 | 第36-38页 |
| ·单点突变 | 第38-44页 |
| ·组合突变 | 第44-48页 |
| ·定点突变 | 第44页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第44页 |
| ·突变酶的表达纯化 | 第44-45页 |
| ·突变酶酶学性质的分析与比较 | 第45-48页 |
| ·乳糖酶 K_m 和 K_(cat) 值的测定 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| ·T211P，G246P，G248P，G207P 定点突变 | 第48-49页 |
| ·L117P，S162P 定点突变 | 第49-50页 |
| ·组合突变 | 第50-51页 |
| 第三章 第211 位氨基酸对乳糖酶LACH 热稳定性的影响 | 第51-57页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-55页 |
| ·定点突变 | 第52页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第52页 |
| ·八个突变体的表达和纯化 | 第52-53页 |
| ·八种重组乳糖酶酶学性质的分析与比较 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 全文结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
