| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-35页 |
| ·转基因技术在植物抗旱耐盐等方面的研究与应用 | 第15-19页 |
| ·功能基因 | 第15-17页 |
| ·转录因子 | 第17-18页 |
| ·信号因子 | 第18-19页 |
| ·耐辐射微生物及其基因资源 | 第19-24页 |
| ·耐辐射微生物的种类与分布 | 第19-21页 |
| ·耐辐射异常球菌抗辐射机制的研究进展 | 第21-23页 |
| ·耐辐射微生物的基因资源及在农业上的应用展望 | 第23-24页 |
| ·调控蛋白IrrE 的研究进展 | 第24-30页 |
| ·IrrE 蛋白的晶体结构研究 | 第25-26页 |
| ·IrrE 蛋白在辐射应答和DNA 修复中的调控作用 | 第26-29页 |
| ·IrrE 蛋白在其他生物中的作用 | 第29-30页 |
| ·细菌耐盐机制的研究进展 | 第30-33页 |
| ·细菌对高渗胁迫的调控机制 | 第30-32页 |
| ·RpoS 在大肠杆菌渗透胁迫应答中的作用 | 第32-33页 |
| ·立题依据 | 第33-34页 |
| ·技术路线 | 第34-35页 |
| 第二章 盐冲击条件下IrrE 增强大肠杆菌海藻糖和甘油的积累 | 第35-53页 |
| ·材料与方法 | 第35-42页 |
| ·试验菌株 | 第35页 |
| ·培养基、酶类及主要生化试剂和耗材 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·引物设计与合成 | 第36页 |
| ·菌体细胞内钾离子含量的测定 | 第36-37页 |
| ·菌体细胞内海藻糖和甘油含量的测定 | 第37-38页 |
| ·菌体细胞内甜菜碱含量的测定 | 第38页 |
| ·用于实时荧光定量PCR 试验菌株的培养条件与处理 | 第38页 |
| ·RNA 的提取与纯化 | 第38-39页 |
| ·RNA 定量与质量检验 | 第39页 |
| ·RNA 反转录合成单链cDNA | 第39-40页 |
| ·细菌基因组的提取与实时荧光定量PCR 引物的验证 | 第40-41页 |
| ·实时荧光定量PCR 与数据处理 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-49页 |
| ·E. coli MGE 和E. coli MGT 细胞内钾离子含量的变化 | 第42-43页 |
| ·利用HPLC 检测细胞内的海藻糖和甘油 | 第43页 |
| ·E. coli MGE 和E. coli MGT 细胞内海藻糖含量的变化 | 第43-44页 |
| ·E. coli MGE 和E. coli MGT 细胞内甘油含量的变化 | 第44页 |
| ·E. coli MGE 和E. coli MGT 细胞内甜菜碱含量的变化 | 第44-45页 |
| ·RNA 的质量检验与引物的验证 | 第45-46页 |
| ·转irrE 菌株中海藻糖相关基因的表达水平 | 第46-47页 |
| ·转irrE 菌株中甘油相关基因的表达水平 | 第47页 |
| ·转irrE 菌株中抗逆相关基因的表达水平 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-53页 |
| ·调控蛋白IrrE 对大肠杆菌非生物胁迫抗性的影响 | 第49-50页 |
| ·调控蛋白IrrE 对大肠杆菌细胞内渗透保护物质的影响 | 第50-53页 |
| 第三章 IrrE 在大肠杆菌rpoS 突变株中的表达及胁迫研究 | 第53-72页 |
| ·材料与方法 | 第53-62页 |
| ·试验菌株与质粒 | 第53页 |
| ·培养基、酶类及主要生化试剂和耗材 | 第53-54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·引物设计与合成 | 第54页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收 | 第54页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第54-55页 |
| ·感受态细胞的制备及热击转化方法 | 第55页 |
| ·重叠延伸PCR 构建融合重组基因 | 第55-57页 |
| ·将pKD46 转入E. coli JM109 | 第57页 |
| ·含有pKD46 的E. coli JM109 电击转化感受态细胞的制备 | 第57-58页 |
| ·线性DNA 的转化及rpoS 突变株的筛选 | 第58页 |
| ·突变株的鉴定 | 第58页 |
| ·转irrE 基因的rpoS 突变株与对照菌株的构建和验证 | 第58-59页 |
| ·转irrE 基因的rpoS 突变株的Western blot 检测 | 第59-61页 |
| ·突变株在含盐培养基中的生长曲线 | 第61页 |
| ·突变株对非生物胁迫的抗性分析的 | 第61-62页 |
| ·利用Biolog 板分析突变株的代谢变化 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-70页 |
| ·rpoS 基因同源序列和Cm 抗性盒的克隆 | 第62-63页 |
| ·含抗性盒线性片段的获得 | 第63-64页 |
| ·突变株的分子验证 | 第64页 |
| ·IrrE 在大肠杆菌rpoS 突变株中的表达 | 第64-66页 |
| ·E. coli RE 和E. coli RT 在含盐培养基中的生长曲线 | 第66-67页 |
| ·E. coli RE 和E. coli RT 在高温、氧化和盐冲击下的生存能力 | 第67-68页 |
| ·Biolog 分析E. coli RE 和E. coli RT 的代谢变化情况 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简介 | 第85页 |
