| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-13页 |
| 第一章 研究背景 | 第13-35页 |
| 第一节 生物钟概述 | 第13-15页 |
| 一 近日节律简介 | 第13-14页 |
| 二 近日节律的特点 | 第14-15页 |
| 第二节 近日节律系统的物质基础 | 第15-20页 |
| 一 哺乳动物的近日节律系统 | 第16-17页 |
| 二 哺乳动物近日节律中枢的位置和大小 | 第17-18页 |
| 三 哺乳动物SCN在脑内区域的神经投射 | 第18-20页 |
| 第三节 近日节律的分子基础 | 第20-29页 |
| 一 生物钟核心基因 | 第20-25页 |
| 二 哺乳动物生物钟基因分子振荡机制及反馈途径 | 第25-27页 |
| 三 近日节律基因表达调控的表观遗传学机制 | 第27-29页 |
| 第四节 生物钟功能发育的研究 | 第29-34页 |
| 一 视交叉上核(SCN)的发育 | 第29-30页 |
| 二 胎儿近日节律的发育与母体的关系 | 第30-32页 |
| 三 近日系统及其功能的发育 | 第32-33页 |
| 四 近日节律发育研究的重要性 | 第33-34页 |
| 第五节 本研究的意义和目的 | 第34-35页 |
| 第二章 叙利亚仓鼠Prokineticin2(PK2)及其受体(PKR2)的同源克隆和发育表达 | 第35-63页 |
| 第一节 前言 | 第35-38页 |
| 第二节 材料与方法 | 第38-53页 |
| 一 实验材料与试剂 | 第38-39页 |
| (一) 叙利亚仓鼠(Syrian hamster)饲养、交配及组织收集 | 第38页 |
| (二) 所用试剂盒,载体和菌种 | 第38-39页 |
| (三) 实验仪器 | 第39页 |
| 二 实验方法和步骤 | 第39-53页 |
| (一) RNA提取 | 第39-40页 |
| (二) BD-SMART RACE实验 | 第40-41页 |
| (三) PK2和PKR2 3’RACE实验 | 第41-42页 |
| (四) PK2/PKR2 5’RACE实验 | 第42-43页 |
| (五) 原位杂交 | 第43-47页 |
| (六) 显微切割和微量RNA提取及定量PCR | 第47-53页 |
| 第三节 结果与分析 | 第53-63页 |
| 一 叙利亚仓鼠SCN区域RNA提取 | 第53页 |
| 二 shPK2及其受体shPKR2 RACE PCR | 第53-55页 |
| 三 叙利亚仓鼠shPK2和shPKR2基因mRNA的拼接 | 第55-57页 |
| 四 shPK2及其受体shPKR2发育阶段在SCN区域表达原位杂交结果 | 第57-60页 |
| 五 荧光定量PCR检测shPK2在SCN区域的发育表达情况 | 第60-63页 |
| 第三章 Clock genes Promoter不同发育阶段甲基化状态及甲基化对启动子转录能力的调控研究 | 第63-90页 |
| 第一节 前言 | 第63-64页 |
| 第二节 材料与方法 | 第64-84页 |
| 一 实验材料 | 第64-65页 |
| (一) 动物饲养与交配 | 第64-65页 |
| (二) 溶液的配置 | 第65页 |
| 二 实验方法 | 第65-84页 |
| (一) 甲基化检测 | 第65-66页 |
| (二) 激光显微切割(LCM)和基因组DNA提取 | 第66-68页 |
| (三) DNA的提取方法 | 第68-69页 |
| (四) 精子的收集与基因组DNA的提取 | 第69页 |
| (五) DNA C-T转换 | 第69-70页 |
| (六) BSP(亚硫酸氢钠转换甲基化PCR) | 第70-76页 |
| (七) mPer1,mPer2和mCry1体外启动子克隆 | 第76-77页 |
| (八) 启动子片段的亚克隆 | 第77-78页 |
| (九) 体外片段甲基化 | 第78-79页 |
| (十) 环化质粒的获得 | 第79-80页 |
| (十一) 细胞培养 | 第80-81页 |
| (十二) 细胞转染 | 第81-82页 |
| (十三) Luciferase检测 | 第82-84页 |
| 第三节 结果分析 | 第84-90页 |
| 一 mPer1、mCry1和mPer2启动子不同发育阶段甲基化状态对比分析 | 第84-87页 |
| 二 所使用甲基化引物倾向性检测 | 第87-88页 |
| 三 重组质粒的构建与luciferase检测结果 | 第88-90页 |
| 第四章 总结与展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-107页 |
| 攻博期间发表的与学位论文相关的科研成果 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 附录 | 第109页 |
