| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-24页 |
| ·哺乳动物防御素研究进展 | 第10-13页 |
| ·哺乳动物防御素的分类与分布 | 第10-11页 |
| ·哺乳动物防御素的分子结构与进化特性 | 第11-12页 |
| ·哺乳动物防御素的作用机理和生物活性 | 第12-13页 |
| ·猪β-防御素(pBD)的研究进展 | 第13-18页 |
| ·猪β-防御素的分类 | 第13-14页 |
| ·猪β-防御素的结构特征 | 第14-15页 |
| ·猪β-防御素的抗菌活性与作用机理 | 第15-16页 |
| ·猪β-防御素克隆表达 | 第16-17页 |
| ·猪β-防御素发展前景 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第18-22页 |
| ·表达宿主和载体 | 第18-19页 |
| ·外源基因的整合 | 第19-20页 |
| ·外源基因的表达 | 第20页 |
| ·毕赤酵母表达系统特点 | 第20-21页 |
| ·毕赤酵母表达系统高表达策略 | 第21-22页 |
| ·研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 2 猪β-防御素-2成熟肽基因酵母工程菌的构建和表达 | 第24-49页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·质粒和菌株 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·主要试剂及配制 | 第24-27页 |
| ·主要应用的软件 | 第27页 |
| ·引物列表 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-39页 |
| ·pBD-2成熟肽基因片段的设计 | 第27-28页 |
| ·pBD-2成熟肽基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第29页 |
| ·pPIC9k-GST重组质粒的构建和鉴定 | 第29-30页 |
| ·pPIC9k-GST-pBD-2和pPIC9k-pBD-2重组载体的构建和鉴定 | 第30-31页 |
| ·含有pPIC9k-GST-pBD-2和pPIC9k-pBD-2质粒的阳性菌落的筛选 | 第31-32页 |
| ·毕赤酵母工程菌的构建 | 第32-35页 |
| ·pBD-2基因在毕赤酵母KM71中的表达 | 第35页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE凝胶的制备及酵母表达上清液的蛋白电泳鉴定 | 第35-37页 |
| ·GST-pBD-2成熟肽的WesternBlot检测 | 第37-38页 |
| ·pBD-2表达上清的抑菌活性检测 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-46页 |
| ·pBD-2基因的PCR扩增与双酶切 | 第39页 |
| ·GST基因的PCR扩增与双酶切 | 第39页 |
| ·pPIC9k载体的双酶切 | 第39-40页 |
| ·pPIC9k-GST-pBD-2重组载体的鉴定 | 第40-41页 |
| ·pPIC9k-pBD-2重组载体的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组毕赤酵母工程菌的筛选与鉴定 | 第42-44页 |
| ·重组酵母蛋白表达 | 第44-45页 |
| ·GST-pBD-2蛋白的WesternBlot验证 | 第45页 |
| ·pBD-2成熟肽的抑菌活性检测 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·pBD-2成熟肽基因的设计 | 第46页 |
| ·pPIC9k-GST-pBD-2和pPIC9k-pBD-2重组载体的构建 | 第46-47页 |
| ·毕赤酵母表达 | 第47-48页 |
| ·pBD-2活性检测 | 第48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
