高产胞外多糖乳酸乳杆菌的选育及其发酵条件的优化
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| 1 乳酸菌胞外多糖的研究进展 | 第12-23页 |
| ·EPS的生物合成及其遗传调控 | 第13-15页 |
| ·EPS的生物合成 | 第13-14页 |
| ·EPS合成的遗传调控 | 第14-15页 |
| ·影响EPS产量的因素 | 第15-17页 |
| ·菌株遗传特性的影响 | 第16页 |
| ·发酵条件的影响 | 第16-17页 |
| ·提高EPS产量的方法 | 第17-22页 |
| ·诱变育种 | 第17-20页 |
| ·优化发酵条件 | 第20-22页 |
| ·乳酸菌EPS结构与功能的关系 | 第22-23页 |
| 2 本实验的目的和内容 | 第23页 |
| 3 本实验的创新之处 | 第23-24页 |
| 第二章 乳酸乳杆菌的分离鉴定 | 第24-31页 |
| 1 材料与方法 | 第24-27页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·MRS培养基 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-27页 |
| ·酸奶乳酸菌的分离 | 第26页 |
| ·菌种保存 | 第26页 |
| ·菌种活化 | 第26页 |
| ·生理生化鉴定 | 第26页 |
| ·形态学鉴定 | 第26-27页 |
| ·16S rDNA序列同源性鉴定 | 第27页 |
| 2 结果分析 | 第27-30页 |
| ·乳酸乳杆菌菌的分离 | 第27页 |
| ·生理生化鉴定 | 第27-29页 |
| ·乳酸乳杆菌革兰氏染色及形态观察 | 第29页 |
| ·乳酸乳杆菌16S rDNA序列同源性鉴定 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 高产胞外多糖的乳酸乳杆菌选育 | 第31-47页 |
| 1 材料与方法 | 第31-37页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·实验试剂 | 第32页 |
| ·实验仪器 | 第32页 |
| ·实验试剂溶液的配制 | 第32-33页 |
| ·亚硝基胍溶液 | 第32-33页 |
| ·HEPES溶液 | 第33页 |
| ·原生质体缓冲液(LPB) | 第33页 |
| ·聚乙二醇PEG6000溶液 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-37页 |
| ·菌株最适生长温度测定 | 第33页 |
| ·菌株最适初始pH的测定 | 第33-34页 |
| ·乳酸乳杆菌的生长曲线 | 第34页 |
| ·EPS的提取 | 第34页 |
| ·EPS的测定 | 第34页 |
| ·乳酸乳杆菌的紫外诱变 | 第34-35页 |
| ·乳酸乳杆菌亚硝基胍诱变 | 第35页 |
| ·致死率的计算 | 第35页 |
| ·基因组改组(原生质体制备、再生和融合) | 第35-36页 |
| ·原生质体灭活条件的优化 | 第36页 |
| ·高产胞外多糖乳酸乳杆菌的筛选 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-43页 |
| ·菌株最适生长温度测定 | 第37页 |
| ·菌株最适生长初始pH测定 | 第37-38页 |
| ·乳酸乳杆菌的生长曲线 | 第38页 |
| ·乳酸乳杆菌的紫外诱变 | 第38-39页 |
| ·乳酸乳杆菌亚硝基胍诱变 | 第39-40页 |
| ·乳酸乳杆菌UV-NTG复合诱变 | 第40页 |
| ·原生质体灭活条件的优化 | 第40-41页 |
| ·基因组改组 | 第41-42页 |
| ·突变型菌株稳定性检测 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-47页 |
| ·关于菌株 | 第43页 |
| ·关于诱变方法 | 第43-44页 |
| ·关于再生率 | 第44-45页 |
| ·关于菌株的筛选 | 第45页 |
| ·关于摇瓶发酵方式 | 第45页 |
| ·关于EPS的测定 | 第45-47页 |
| 第四章 乳酸乳杆菌发酵条件的优化 | 第47-61页 |
| 1 材料与方法 | 第47-51页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·实验试剂 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·M17培养基 | 第48页 |
| ·APT培养基 | 第48-49页 |
| ·SL培养基 | 第49页 |
| ·Elliker培养基 | 第49页 |
| ·TJA培养基 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·发酵过程中pH的测定 | 第49页 |
| ·发酵过程中EPS产出曲线 | 第49-50页 |
| ·产胞外多糖最适发酵培养基的确定 | 第50页 |
| ·Plackett-Burman试验设计 | 第50-51页 |
| ·显著因子添加水平的研究 | 第51页 |
| ·中心组合试验设计 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-59页 |
| ·发酵过程中pH及胞外多糖产出曲线 | 第51-52页 |
| ·产胞外多糖最适发酵培养基的确定 | 第52-53页 |
| ·影响胞外多糖产量显著因素的筛选 | 第53-55页 |
| ·显著因子添加水平的研究 | 第55-56页 |
| ·中心组合试验结果 | 第56-59页 |
| ·多元二次模型的建立以及回归分析检验 | 第56-58页 |
| ·EPS响应面分析 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| ·关于培养基 | 第59页 |
| ·关于发酵的关键因子 | 第59-60页 |
| ·关于优化方法 | 第60-61页 |
| 第五章 基因组改组选育耐酵母粉EPS高产菌株 | 第61-72页 |
| 1 材料与方法 | 第61-63页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·实验试剂 | 第62页 |
| ·实验仪器 | 第62页 |
| ·实验试剂溶液的配制 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62页 |
| ·YE培养基 | 第62页 |
| ·发酵培养基 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·酵母粉浓度对L1-WT发酵过程参数的影响 | 第62-63页 |
| ·改组用出发菌株的制备 | 第63页 |
| ·原生质体的制备和融合 | 第63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-70页 |
| ·酵母粉浓度对L1-WT生长速率的影响 | 第63-64页 |
| ·酵母粉浓度对L1-WT产EPS速率的影响 | 第64-65页 |
| ·出发菌株的获得 | 第65-66页 |
| ·融合子与亲本的菌落形态比较 | 第66页 |
| ·基因组改组 | 第66-67页 |
| ·诱变菌株与野生型菌株生长比较 | 第67-68页 |
| ·菌株摇瓶发酵EPS产量比较 | 第68-69页 |
| ·改组菌株与原始菌株摇瓶发酵特征比较 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| ·关于初筛的方法 | 第70页 |
| ·关于酵母粉 | 第70-71页 |
| ·关于基因工程技术 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 附录一 16S rDNA测序结果 | 第88-89页 |
| 附录二 读研期间发表的论文 | 第89页 |
