| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第10-15页 |
| 1.1 有丝分裂中纺锤体定位的意义 | 第10页 |
| 1.2 参与纺锤体迁移的蛋白 | 第10-11页 |
| 1.3 芽殖酵母中纺锤体定位研究的进展 | 第11-12页 |
| 1.4 研究问题的提出 | 第12-15页 |
| 第2章 Num1蛋白C末端磷酸化的检测 | 第15-26页 |
| 2.1 材料和方法 | 第15-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第15页 |
| 2.1.2 总蛋白制备 | 第15-16页 |
| 2.1.3 蛋白免疫印迹分析 | 第16-17页 |
| 2.1.4 Phos-tagSDS-PAGE检测蛋白质的磷酸化 | 第17-18页 |
| 2.1.5 免疫沉淀(IP)实验 | 第18页 |
| 2.1.6 蛋白磷酸酶处理 | 第18-19页 |
| 2.1.7 突变菌株构建 | 第19-20页 |
| 2.1.8 酵母基因组DNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2 实验结果及分析 | 第21-25页 |
| 2.2.1 MMNum1是一个磷酸化的蛋白 | 第21-22页 |
| 2.2.2 MMNum1 磷酸化的消除 | 第22-23页 |
| 2.2.3 去掉C末端序列减弱MMNum1的磷酸化 | 第23-25页 |
| 2.3 小结 | 第25-26页 |
| 第3章 Num1的互作蛋白的分离鉴定 | 第26-36页 |
| 3.1 材料和方法 | 第26-29页 |
| 3.1.1 酵母菌株及培养基 | 第26页 |
| 3.1.2 质粒构建 | 第26-28页 |
| 3.1.3 大肠杆菌细胞培养 | 第28页 |
| 3.1.4 蛋白可溶性检测 | 第28页 |
| 3.1.5 Pull-down实验 | 第28-29页 |
| 3.1.6 Pull-down样品检测和分析 | 第29页 |
| 3.2 结果与分析 | 第29-35页 |
| 3.2.1 PA结构域表达载体筛选 | 第29-33页 |
| 3.2.2 Num1PA(1-303)-PCN-S-TEV-Z蛋白的纯化 | 第33页 |
| 3.2.3 PA结构域与酵母细胞裂解液的Pull down实验 | 第33-34页 |
| 3.2.4 PA结构域互作蛋白的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 小结 | 第35-36页 |
| 第4章 免疫共沉淀分离Num1的互作蛋白 | 第36-43页 |
| 4.1 材料和方法 | 第36-40页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 4.1.2 突变菌株构建 | 第36-37页 |
| 4.1.3 突变体基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 4.1.4 免疫共沉淀分离Num1的互作蛋白 | 第38-39页 |
| 4.1.5 免疫共沉淀样品的检测 | 第39-40页 |
| 4.2 实验结果及分析 | 第40-42页 |
| 4.2.1 突变菌株构建 | 第40-41页 |
| 4.2.2 免疫共沉淀样品银染结果 | 第41-42页 |
| 4.3 小结 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第50页 |
| 参与的科研课题 | 第50页 |
| 参与的学术会议 | 第50页 |
