| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-14页 |
| 本研究的创新之处 | 第14-15页 |
| 1 伐地那非及其类似物免疫检测的方法的建立 | 第14页 |
| 2 (氟)喹诺酮抗菌素多组分免疫检测方法的建立 | 第14-15页 |
| 缩略语(ABBREVIATIONS) | 第15-17页 |
| 第一部分 基于通用抗体检测伐地那非及其类似物免疫学方法的研究 | 第17-63页 |
| 1 磷酸二酯酶-5抑制剂检测方法文献综述 | 第17-23页 |
| ·违法添加PDE-5抑制剂药物的危害性 | 第17-19页 |
| ·违法添加PDE-5药物筛查方法研究进展 | 第19-21页 |
| ·研究内容和意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| ·试剂与仪器 | 第23-26页 |
| ·实验方法 | 第26-41页 |
| ·阳离子化牛血清白蛋白(MBSA)的制备 | 第26页 |
| ·阳离子化卵清白蛋白(MOVA)的制备 | 第26页 |
| ·VARD摩尔消光系数的测定 | 第26页 |
| ·人工抗原蛋白浓度的测定使用双缩脲法 | 第26-27页 |
| ·VARD人工抗原偶联比的计算 | 第27页 |
| ·pH值对VARD人工抗原合成效果影响的研究 | 第27页 |
| ·VARD免疫抗原的制备 | 第27-28页 |
| ·伐地那非人工检测抗原的制备 | 第28-29页 |
| ·抗VARD多克隆抗体的制备 | 第29-30页 |
| ·动物免疫 | 第29页 |
| ·抗体效价测定 | 第29-30页 |
| ·小鼠抗VARD多克隆抗体的特异性测定 | 第30页 |
| ·抗VARD单克隆抗体的制备 | 第30-35页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第30-31页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的准备 | 第31页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第31页 |
| ·细胞融合 | 第31-32页 |
| ·杂交瘤细胞筛选(间接ELISA法) | 第32-33页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的检定(间接竞争ELISA法) | 第33页 |
| ·杂交瘤细胞克隆化(有限稀释法) | 第33-34页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第34页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的生产(小鼠腹腔生产法) | 第34页 |
| ·抗体的纯化 | 第34-35页 |
| ·各株单抗对伐地那非类似物的识别能力的鉴别 | 第35-36页 |
| ·测定各株单抗对VARD类似物piperidenafil的交叉反应率 | 第35页 |
| ·测定各株单抗对VARD水解产物的识别能力 | 第35-36页 |
| ·抗VARD单克隆抗体4B9特性的鉴定 | 第36-38页 |
| ·单抗亲和力常数测定 | 第36页 |
| ·VARD间接竞争ELISA的标准曲线的建立 | 第36-37页 |
| ·单克隆抗体特异性测定(间接竞争ELISA法) | 第37-38页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体稳定性测定 | 第38页 |
| ·同时检测VARD及其类似物ELISA方法的建立 | 第38-41页 |
| ·检测抗原和单克隆抗体工作浓度的确定 | 第38页 |
| ·同时检测VARD及其类似物ELISA方法的检测过程 | 第38-39页 |
| ·检测缓冲液中BSA浓度对ELISA检测读数影响的研究 | 第39页 |
| ·样品预处理的操作步骤 | 第39页 |
| ·样品抽提缓冲液pH值对检测回收率影响的研究 | 第39页 |
| ·中成药基质对ELISA检测结果干扰的测定 | 第39-40页 |
| ·ELISA系统对伐地那非的最低检出限的测定 | 第40页 |
| ·ELISA系统对VARD样品加标回收率和变异系数的测定 | 第40-41页 |
| ·使用ELISA和HPLC检测中成药样品中VARD的含量 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-55页 |
| ·VARD人工抗原的制备及免疫效果 | 第41-45页 |
| ·pH值对VARD人工抗原合成效果影响的研究 | 第41-42页 |
| ·伐地那非在320nm波长的摩尔消光系数K的测定 | 第42-43页 |
| ·VARD免疫抗原(VARD-MBSA)的制备 | 第43-44页 |
| ·VARD检测抗原(VARD-MOVA)的制备 | 第44页 |
| ·VARD-MBSA抗原免疫动物的效果 | 第44-45页 |
| ·抗VARD单克隆抗体的制备 | 第45-46页 |
| ·细胞融合 | 第45页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第45-46页 |
| ·识别VARD药效必需基团的单克隆抗体的鉴别 | 第46-47页 |
| ·检验每株单抗对piperidenafil的交叉反应率 | 第46页 |
| ·鉴别每株单抗对VARD水解产物的识别能力 | 第46-47页 |
| ·抗VARD单克隆抗体4B9的生产和纯化 | 第47-48页 |
| ·抗VARD单克隆抗体4B9的特性的鉴定 | 第48-49页 |
| ·杂交瘤细胞4B9分泌抗体的稳定性 | 第48页 |
| ·单克隆抗体4B9对VARD亲和力常数的测定 | 第48-49页 |
| ·抗VARD单克隆抗体特异性测定 | 第49页 |
| ·同时检测VARD及其类似物ELISA方法的建立 | 第49-55页 |
| ·VARD间接竞争ELISA标准曲线的建立 | 第49-50页 |
| ·检测缓冲液中BSA浓度对ELISA检测结果OD_(450)值影响的研究 | 第50页 |
| ·样品抽提液pH值的对样品检测回收率的影响 | 第50-51页 |
| ·中成药基质对ELISA检测结果的影响的研究 | 第51-52页 |
| ·ELISA系统对VARD的最低检出浓度限度的测定 | 第52页 |
| ·ELISA系统检测VARD加标样品的回收率和变异系数 | 第52-53页 |
| ·伐地那非及Piperidenafil的HPLC检测结果 | 第53-54页 |
| ·VARD及Piperidenafil的HPLC保留时间 | 第53页 |
| ·伐地那非HPLC检测标准曲线 | 第53-54页 |
| ·ELISA和HPLC检测保健品中VARD的含量结果比较 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-62页 |
| ·VARD人工抗原的制备 | 第55-59页 |
| ·VARD连接位点的选择 | 第55-57页 |
| ·连接试剂的选择 | 第57页 |
| ·pH值对VARD人工抗原连接效果的影响 | 第57-58页 |
| ·载体蛋白的选择 | 第58页 |
| ·反应投料比例的优化 | 第58-59页 |
| ·抗VARD单克隆抗体的制备 | 第59页 |
| ·小鼠免疫方案的设计 | 第59页 |
| ·抗VARD单克隆抗体的筛选 | 第59页 |
| ·单克隆抗体对VARD药效必需基团特异性的鉴别 | 第59-61页 |
| ·检验每株单抗对piperidenafil的交叉反应率 | 第59-61页 |
| ·每株单抗对伐地那非水解产物的识别能力的研究 | 第61页 |
| ·伐地那非的ELISA的检测 | 第61-62页 |
| ·VARD检测阈值的设定 | 第61页 |
| ·ELISA检测对VARD的最低检出浓度的认定 | 第61-62页 |
| 5 小结 | 第62-63页 |
| 第二部分 基于通用抗体检测(氟)喹诺酮总量免疫学方法的研究 | 第63-119页 |
| 6 (氟)喹诺酮类药物残留检测方法文献综述 | 第63-71页 |
| ·(氟)喹诺酮类抗菌素简介 | 第63页 |
| ·动物性食品中(氟)喹诺酮类抗菌素残留的危害 | 第63-65页 |
| ·(氟)喹诺酮类抗菌素残留检测研究进展 | 第65-69页 |
| ·研究内容和意义 | 第69-71页 |
| 7 材料与方法 | 第71-85页 |
| ·主要实验材料 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72-85页 |
| ·CPFX人工抗原的制备 | 第72-73页 |
| ·糖基化牛血清白蛋白的制备 | 第72页 |
| ·CPFX免疫抗原的制备 | 第72页 |
| ·CPFX人工抗原偶联比的计算 | 第72-73页 |
| ·CPFX检测抗原的制备 | 第73页 |
| ·抗CPFX多克隆抗体的制备 | 第73-75页 |
| ·动物免疫 | 第73-74页 |
| ·抗体效价测定(间接ELISA法) | 第74页 |
| ·小鼠多克隆抗体抗CPFX的竞争ELISA测定 | 第74-75页 |
| ·抗CPFX单克隆抗体的制备 | 第75-77页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第75页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的准备 | 第75页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第75页 |
| ·细胞融合 | 第75页 |
| ·杂交瘤细胞筛选(间接ELISA法) | 第75-76页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的鉴定(间接竞争ELISA法) | 第76页 |
| ·杂交瘤细胞克隆化(有限稀释法) | 第76页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第76页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第76页 |
| ·单克隆抗体的生产(小鼠腹腔生产法) | 第76页 |
| ·抗体的纯化 | 第76-77页 |
| ·抗CPFX单克隆抗体特性的鉴定 | 第77-79页 |
| ·单抗亲和力常数测定 | 第77页 |
| ·CPFX间接竞争ELISA的标准曲线的建立 | 第77-78页 |
| ·单克隆抗体对主要(氟)喹喏酮类抗菌素检测谱的测定 | 第78页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体稳定性测定 | 第78页 |
| ·抗CPFX单克隆抗体对几种主要抗生素交叉反应率的测定 | 第78-79页 |
| ·(氟)喹喏酮药物多残留间接ELISA的建立 | 第79-83页 |
| ·检测抗原和单克隆抗体工作浓度的确定 | 第79页 |
| ·CPFX间接竞争ELISA的标准曲线的检测过程 | 第79-80页 |
| ·甲醇浓度对CPFX间接竞争ELISA信号强度影响的研究 | 第80页 |
| ·抽提缓冲液的离子强度、pH值和甲醇浓度对加标回收率的影响的研究 | 第80页 |
| ·鸡肝样品ELISA检测前预处理 | 第80-81页 |
| ·鸡蛋样品ELISA检测前预处理 | 第81页 |
| ·ELISA系统CPFX加标回收率和变异系数的检测 | 第81-82页 |
| ·鸡肝和鸡蛋样品HPLC上样前处理 | 第82页 |
| ·使用ELISA和HPLC检测鸡肝样品中FQs的含量 | 第82-83页 |
| ·Biotin/Avidin系统直接竞争ELISA检测方法初探 | 第83-85页 |
| ·活泼酯化生物素的制备 | 第83页 |
| ·Avidin-HRP结合物的制备 | 第83页 |
| ·生物素化CPFX抗原的制备 | 第83-84页 |
| ·Biotin/Avidin系统直接竞争ELISA工作条件的确定 | 第84页 |
| ·CPFX直接竞争ELISA的检测过程 | 第84-85页 |
| ·CPFX直接竞争ELISA系统加标回收率和变异系数的测定 | 第85页 |
| 8 结果 | 第85-97页 |
| ·CPFX人工抗原的制备 | 第85-87页 |
| ·CPFX在340nm波长的摩尔消光系数K的测定 | 第85-86页 |
| ·CPFX免疫抗原(CPFX-GBSA)的制备 | 第86-87页 |
| ·环丙沙星人工检测抗原的制备 | 第87页 |
| ·CPFX-GBSA抗原的免疫效果 | 第87页 |
| ·抗CPFX单克隆抗体的制备 | 第87-89页 |
| ·细胞融合 | 第87-88页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第88页 |
| ·抗CPFX单克隆抗体的生产 | 第88-89页 |
| ·单抗6D5、1G3对主要(氟)喹喏酮药物检测谱的测定 | 第89页 |
| ·抗CPFC单克隆抗体6D5的鉴定 | 第89-91页 |
| ·杂交瘤细胞6D5分泌抗体的稳定性 | 第89-90页 |
| ·单克隆抗体6D5亲和力常数的测定 | 第90页 |
| ·抗体6D5对几种常用抗生素特异性测定结果 | 第90-91页 |
| ·(氟)喹喏酮多残留间接ELISA检测方法的建立 | 第91-96页 |
| ·以CPFX为代表药物建立ELISA标准曲线 | 第91-92页 |
| ·甲醇浓度对ELISA信号强度的影响 | 第92页 |
| ·抽提缓冲液的离子强度、pH值和甲醇浓度对加标回收率的影响 | 第92-93页 |
| ·鸡肝、鸡蛋样品CPFX加标回收率和变异系数的测定 | 第93页 |
| ·间接竞争ELISA法与HPLC方法检测样品中FQs | 第93-96页 |
| ·Biotin/Avidin直接竞争ELISA检测方法的建立 | 第96-97页 |
| ·以CPFX为代表药物建立ELISA标准曲线 | 第96页 |
| ·鸡肝、鸡蛋样品CPFX加标回收率和变异系数的测定 | 第96-97页 |
| 9 讨论 | 第97-107页 |
| ·环丙沙星人工抗原的制备 | 第97-102页 |
| ·(氟)喹喏酮代表药品的选择 | 第97-98页 |
| ·连接试剂的选择 | 第98-99页 |
| ·蛋白载体的糖基化修饰 | 第99-102页 |
| ·反应投料比例的优化 | 第102页 |
| ·抗CPFX单克隆抗体的制备 | 第102-105页 |
| ·小鼠免疫 | 第102-103页 |
| ·单抗6D5、1G3对主要(氟)喹喏酮药物检测谱的测定 | 第103页 |
| ·样品抽提过程对ELISA检测回收率的影响 | 第103-104页 |
| ·本研究建立的ELISA对(氟)喹诺酮抗菌素多残留的检测效果 | 第104-105页 |
| ·检测CPFX的Biotin/Avidin-ELISA检测方法的建立 | 第105-107页 |
| ·Biotin/Avidin-ELISA检测方法的设计 | 第105页 |
| ·生物素化CPFX检测抗原的制备 | 第105-106页 |
| ·Biotin/Avidin-ELISA检测方法的条件优化 | 第106-107页 |
| 10 小结 | 第107页 |
| 11 参考文献 | 第107-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 个人简历 | 第120-121页 |
| 攻读博士研究生期间撰写的学术论文 | 第121页 |
