| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-30页 |
| ·双孢蘑菇概况 | 第13-14页 |
| ·多酚氧化酶概况 | 第14-21页 |
| ·多酚氧化酶分离纯化的研究进展 | 第14-15页 |
| ·多酚氧化酶酶学性质的研究进展 | 第15-17页 |
| ·多酚氧化酶基因研究进展 | 第17-21页 |
| ·多酚氧化酶基因的异源表达 | 第21页 |
| ·RACE技术 | 第21-24页 |
| ·RACE技术的原理 | 第22-23页 |
| ·RACE技术的优缺点 | 第23-24页 |
| ·RACE技术的改良 | 第24页 |
| ·蛋白的酶交联作用 | 第24-27页 |
| ·转谷氨酰胺酶对蛋白的交联作用 | 第25-26页 |
| ·多酚氧化酶对蛋白的交联作用 | 第26-27页 |
| ·研究的目的、意义和研究内容 | 第27-30页 |
| ·本论文研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| ·研究内容 | 第28-30页 |
| 第2章 双孢蘑菇多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质的研究 | 第30-46页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料与设备 | 第30-33页 |
| ·材料与试剂 | 第30页 |
| ·仪器与设备 | 第30-31页 |
| ·溶液的配制 | 第31-33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·原料丙酮粉的制备 | 第33页 |
| ·PPO粗酶液的制备 | 第33页 |
| ·双孢蘑菇PPO的分离纯化 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第34-35页 |
| ·蛋白N端测序 | 第35页 |
| ·双孢蘑菇PPO酶学性质的研究方法 | 第35-36页 |
| ·PPO活力测定 | 第36页 |
| ·蛋白含量测定 | 第36-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-44页 |
| ·双孢蘑菇和其它食用菌、植物中PPO的活力和含量比较 | 第38-39页 |
| ·双孢蘑菇PPO的分离纯化效果 | 第39-40页 |
| ·双孢蘑菇PPO的酶学性质 | 第40-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·双孢蘑菇PPO的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE检测PPO的纯度和分子量 | 第45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第3章 双孢蘑菇多酚氧化酶对乳蛋白交联的影响 | 第46-72页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·材料与设备 | 第46-48页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·主要仪器与设备 | 第46-47页 |
| ·溶液的配制 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-53页 |
| ·酪蛋白的制备 | 第48页 |
| ·乳清蛋白的制备 | 第48页 |
| ·PPO粗酶液的制备 | 第48页 |
| ·PPO交联酪蛋白的实验方案 | 第48-50页 |
| ·PPO对乳清蛋白交联的影响实验方案 | 第50-51页 |
| ·蛋白乳化性及其稳定性的测定 | 第51页 |
| ·蛋白起泡性及其稳定性的测定 | 第51-52页 |
| ·交联蛋白质的抗原性评估 | 第52页 |
| ·PPO活力测定 | 第52-53页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第53页 |
| ·蛋白含量测定 | 第53页 |
| ·统计学处理 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-70页 |
| ·双孢蘑菇PPO对酪蛋白交联的影响 | 第53-57页 |
| ·交联后酪蛋白功能特性的变化 | 第57-62页 |
| ·交联后β-酪蛋白抗原性的变化 | 第62-64页 |
| ·双孢蘑菇PPO对乳清蛋白交联的影响 | 第64-67页 |
| ·交联后乳清蛋白功能特性的变化 | 第67页 |
| ·交联后乳清蛋白抗原性的变化 | 第67-70页 |
| ·讨论 | 第70页 |
| ·PPO对乳蛋白的交联作用 | 第70页 |
| ·PPO交联对乳蛋白抗原性的影响 | 第70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第4章 双孢蘑菇PPO新基因的克隆 | 第72-102页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·材料与设备 | 第72-76页 |
| ·原料、菌株、质粒 | 第72-73页 |
| ·试剂盒、工具酶、分子量Marker及主要生化试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器与设备 | 第73-74页 |
| ·PCR引物 | 第74页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第74-76页 |
| ·实验方法 | 第76-85页 |
| ·双孢蘑菇总RNA的提取 | 第76页 |
| ·RNA纯度检测 | 第76-77页 |
| ·RT-PCR扩增PPO保守区基因片段 | 第77-78页 |
| ·PPO保守区新基因片段的cDNA末端快速扩增 | 第78-81页 |
| ·PPO新基因全长的扩增 | 第81-82页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第82页 |
| ·PCR产物回收液的A尾的添加 | 第82-83页 |
| ·目的基因的T/A克隆、筛选和鉴定 | 第83-84页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第84页 |
| ·DNA测序及序列分析 | 第84-85页 |
| ·系统进化树分析 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-100页 |
| ·双孢蘑菇总RNA | 第85-86页 |
| ·PPO保守区基因片段 | 第86-88页 |
| ·PPO保守区新基因片段的cDNA 3'RACE | 第88-90页 |
| ·PPO保守区新基因片段的cDNA 5'RACE | 第90-91页 |
| ·PPO新基因 | 第91-93页 |
| ·PP03和PPO4氨基酸序列 | 第93-94页 |
| ·系统进化树 | 第94-98页 |
| ·PPO3和PPO4二级结构和三级结构预测 | 第98-99页 |
| ·PPO3和PPO4 C-端切割位点 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-101页 |
| ·简并引物的设计 | 第100-101页 |
| ·RACE法扩增cDNA末端 | 第101页 |
| ·本章小结 | 第101-102页 |
| 第5章 PPO3和PPO4成熟酶基因的克隆及在原核系统中的表达 | 第102-122页 |
| ·引言 | 第102页 |
| ·材料与设备 | 第102-106页 |
| ·菌株和质粒 | 第102页 |
| ·试剂盒、工具酶、分子量Marker及主要试剂 | 第102-103页 |
| ·主要仪器与设备 | 第103-104页 |
| ·PCR引物 | 第104页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第104-106页 |
| ·实验方法 | 第106-113页 |
| ·MPPO3和MPPO4基因的克隆 | 第106-109页 |
| ·MPPO3和MPPO4基因在大肠杆菌中的表达 | 第109-113页 |
| ·结果与分析 | 第113-120页 |
| ·PPO3和PPO4成熟酶基因 | 第113-115页 |
| ·在原核系统中表达MPPO3和MPPO4基因 | 第115-119页 |
| ·表达蛋白的western blotting鉴定结果 | 第119-120页 |
| ·讨论 | 第120-121页 |
| ·本章小结 | 第121-122页 |
| 第6章 结论与展望 | 第122-124页 |
| ·结论 | 第122-123页 |
| ·本研究的创新点 | 第123页 |
| ·展望 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-133页 |
| 附录A CR1碱基序列及推导的氨基酸序列 | 第133-134页 |
| 附录B CR2碱基序列及推导的氨基酸序列 | 第134-135页 |
| 附录C CR3碱基序列及推导的氨基酸序列 | 第135-136页 |
| 附录D CR4碱基序列及推导的氨基酸序列 | 第136-137页 |
| 附录E CR5与CRl的序列比对结果 | 第137-139页 |
| 附录F CR3 3'RACE测序结果 | 第139-140页 |
| 附录G CR4 3'RACE测序结果 | 第140-141页 |
| 附录H CR3 5'RACE测序结果 | 第141-142页 |
| 附录I CR4 5'RACE测序结果 | 第142-143页 |
| 附录J PPO3 cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第143-145页 |
| 附录K PPO4 cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第145-147页 |
| 附录L 重组克隆质粒pMD19-T-MPPO3测序结果 | 第147-148页 |
| 附录M 重组克隆质粒pMD19-T-MPPO4测序结果 | 第148-149页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第149页 |
