| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 主要符号对照表 | 第15-16页 |
| 文献综述 | 第16-36页 |
| 第一章 猪瘟病毒与猪瘟研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1 猪瘟病毒研究进展 | 第16-19页 |
| 1.1.1 CSFV的基因组 | 第16-17页 |
| 1.1.2 CSFV的结构蛋白 | 第17页 |
| 1.1.3 CSFV的非结构蛋白 | 第17-19页 |
| 1.1.4 CSFV毒株间的毒力差异 | 第19页 |
| 1.2 猪瘟病毒与天然免疫 | 第19-20页 |
| 1.3 猪瘟流行病学与临床症状 | 第20-21页 |
| 1.4 猪瘟的防控 | 第21-23页 |
| 第二章 干扰素刺激基因15和细胞自噬研究进展 | 第23-36页 |
| 2.1 干扰素与干扰素刺激基因 | 第23-25页 |
| 2.2 ISG15与ISG化研究进展 | 第25-31页 |
| 2.2.1 ISG15 研究现状 | 第25-27页 |
| 2.2.2 ISG15和ISG化的抗病毒作用 | 第27-28页 |
| 2.2.3 ISG化对病毒蛋白的影响 | 第28-29页 |
| 2.2.4 ISG化对细胞蛋白的影响 | 第29-30页 |
| 2.2.5 ISG15 对细胞自噬的影响 | 第30-31页 |
| 2.3 细胞自噬研究进展 | 第31-36页 |
| 2.3.1 细胞自噬简介 | 第31页 |
| 2.3.2 自噬的分类及机制 | 第31-33页 |
| 2.3.3 细胞自噬与免疫细胞 | 第33-34页 |
| 2.3.4 重要的自噬蛋白 | 第34-35页 |
| 2.3.5 细胞自噬与病毒感染 | 第35-36页 |
| 试验研究 | 第36-98页 |
| 第三章 干扰素刺激基因15对猪瘟病毒复制的影响 | 第36-56页 |
| 3.1 材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 菌株、毒株、细胞与质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第37页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 3.2 方法 | 第38-41页 |
| 3.2.1 载体的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.2 过表达及敲低ISG15 的重组慢病毒包装 | 第39页 |
| 3.2.3 过表达及敲低ISG15 细胞株的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.4 过表达或敲低ISG15对CSFV复制影响的检测 | 第40页 |
| 3.2.5 IFN-α处理PAM细胞对ISG15 表达及ISG化水平影响 | 第40-41页 |
| 3.2.6 IFN-α预处理敲低ISG15 细胞对CSFV mRNA水平的影响 | 第41页 |
| 3.2.7 CSFV感染PAM细胞后ISG15 表达及ISG化水平变化的检测 | 第41页 |
| 3.2.8 数据统计分析 | 第41页 |
| 3.3 结果 | 第41-53页 |
| 3.3.1 真核表达载体及干扰载体的构建及鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3.2 过表达ISG15对CSFV复制的影响 | 第43-46页 |
| 3.3.3 敲低ISG15对CSFV复制的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.4 IFN-α对 ISG15 表达及ISG化水平的影响 | 第47-50页 |
| 3.3.5 ISG15 介导IFN-α的抗病毒作用 | 第50页 |
| 3.3.6 CSFV感染对ISG15 的表达及ISG化水平的影响 | 第50-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 干扰素刺激基因15 抑制猪瘟病毒复制依赖ISG化 | 第56-73页 |
| 4.1 材料 | 第57页 |
| 4.1.1 菌株、毒株、细胞与质粒 | 第57页 |
| 4.1.2 主要试剂及其试剂盒 | 第57页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第57页 |
| 4.2 方法 | 第57-61页 |
| 4.2.1 干扰载体的构建及鉴定 | 第57页 |
| 4.2.2 ISG15 定点突变载体构建及鉴定 | 第57-59页 |
| 4.2.3 ISG15 突变体构建及鉴定 | 第59页 |
| 4.2.4 敲低USP18 的重组慢病毒包装 | 第59页 |
| 4.2.5 敲低USP18 细胞株的构建与鉴定 | 第59页 |
| 4.2.6 ISG15 突变体对CSFV复制影响的检测 | 第59-60页 |
| 4.2.7 敲低ISG15 的细胞中表达ISG15 突变体对CSFV复制影响的检测 | 第60页 |
| 4.2.8 敲低USP18对CSFV复制及ISG化水平影响的检测 | 第60-61页 |
| 4.2.9 敲低USP18 或敲低ISG15对IFN通路效应分子影响的检测 | 第61页 |
| 4.2.10 数据统计分析 | 第61页 |
| 4.3 结果 | 第61-71页 |
| 4.3.1 干扰USP18 载体的构建及鉴定 | 第61-62页 |
| 4.3.2 ISG15 突变体构建及鉴定 | 第62-64页 |
| 4.3.3 敲低USP18 细胞株构建及鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3.4 ISG15 突变体对CSFV复制的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.5 ISG15 敲低细胞中过表达突变ISG15对CSFV的影响 | 第66-68页 |
| 4.3.6 敲低USP18对CSFV复制及ISG化水平的影响 | 第68页 |
| 4.3.7 敲低USP18 或敲低ISG15对IFN通路效应分子表达的影响 | 第68-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-73页 |
| 第五章 ISG15 通过ISG化 BECN1 影响猪瘟病毒复制 | 第73-98页 |
| 5.1 材料 | 第74页 |
| 5.1.1 菌株、毒株、细胞与质粒 | 第74页 |
| 5.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第74页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第74页 |
| 5.2 方法 | 第74-80页 |
| 5.2.1 载体的构建及鉴定 | 第74-75页 |
| 5.2.2 CSFV感染时过表达ISG15 对细胞自噬影响的检测 | 第75-76页 |
| 5.2.3 CSFV感染时敲低ISG15 对细胞自噬影响的检测 | 第76页 |
| 5.2.4 敲低ISG15 细胞中自噬阻断剂对CSFV复制及细胞自噬的检测 | 第76-77页 |
| 5.2.5 雷帕霉素处理时过表达ISG15 对细胞自噬影响的检测 | 第77页 |
| 5.2.6 雷帕霉素处理时敲低ISG15 对细胞自噬影响的检测 | 第77页 |
| 5.2.7 ISG15 调控BECN1 影响CSFV复制及细胞自噬的检测 | 第77-78页 |
| 5.2.8 ISG化 BECN1 模拟物对CSFV复制及细胞自噬影响的检测 | 第78-79页 |
| 5.2.9 免疫共沉淀验证HERC5与BECN1 的相互作用 | 第79页 |
| 5.2.10 GST pull-down验证HERC5与BECN1 的相互作用 | 第79-80页 |
| 5.2.11 激光共聚焦验证HERC5与BECN1 共定位 | 第80页 |
| 5.2.12 数据统计分析 | 第80页 |
| 5.3 结果 | 第80-95页 |
| 5.3.1 CSFV感染时过表达ISG15 对细胞自噬的影响 | 第80-81页 |
| 5.3.2 CSFV感染时敲低ISG15 对细胞自噬的影响 | 第81-83页 |
| 5.3.3 敲低ISG15 细胞中自噬阻断剂对细胞自噬及CSFV复制的影响 | 第83-85页 |
| 5.3.4 雷帕霉素处理时过表达ISG15 对细胞自噬的影响 | 第85-86页 |
| 5.3.5 雷帕霉素处理时敲低ISG15 对细胞自噬的影响 | 第86-87页 |
| 5.3.6 ISG15 调控BECN1 影响细胞自噬及CSFV复制 | 第87-92页 |
| 5.3.7 ISG化关键酶HERC5 与自噬关键蛋白BECN1 互作验证 | 第92-95页 |
| 5.4 讨论 | 第95-97页 |
| 5.5 小结 | 第97-98页 |
| 结论 | 第98页 |
| 本文的创新点 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-119页 |
| 附录A 常见试验操作流程 | 第119-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 作者简介 | 第124-125页 |
