| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第16-27页 |
| 1.1 内质网应激 | 第16-19页 |
| 1.1.1 内质网应激与未折叠蛋白反应 | 第16-17页 |
| 1.1.2 内质网应激与泛素化机制 | 第17-18页 |
| 1.1.3 内质网应激细胞及动物模型构建 | 第18-19页 |
| 1.1.4 内质网应激与肝脏损伤 | 第19页 |
| 1.1.5 内质网应激与代谢 | 第19页 |
| 1.2 热应激 | 第19-21页 |
| 1.2.1 热应激与IGF-1 | 第19-20页 |
| 1.2.2 热应激与糖代谢 | 第20页 |
| 1.2.3 热应激与内质网应激 | 第20-21页 |
| 1.3 葡萄糖调节蛋白94 | 第21-24页 |
| 1.3.1 GRP94 生理功能 | 第21-22页 |
| 1.3.2 GRP94 与其互作蛋白 | 第22-23页 |
| 1.3.3 GRP94与IGF-1 | 第23-24页 |
| 1.3.4 GRP94 与肝脏疾病 | 第24页 |
| 1.4 蛋白质组学研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4.1 iTRAQ技术简介 | 第24页 |
| 1.4.2 iTRAQ技术的应用 | 第24-25页 |
| 1.5 蛋白质定量验证——PRM技术的应用 | 第25页 |
| 1.5.1 PRM技术简介 | 第25页 |
| 1.5.2 PRM技术的应用 | 第25页 |
| 1.6 研究内容与目的 | 第25-27页 |
| 第二章 持续高温应激下生长猪GRP94与IGF-1 表达规律研究 | 第27-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 2.1.1 试验设计 | 第27-28页 |
| 2.1.2 饲养管理 | 第28页 |
| 2.1.3 样品采集 | 第28-29页 |
| 2.1.4 检测指标与方法 | 第29页 |
| 2.1.5 数据分析 | 第29-30页 |
| 2.2 结果 | 第30-34页 |
| 2.2.1 持续高温应激下GRP94 的表达 | 第30-31页 |
| 2.2.2 血糖及胰岛素含量 | 第31页 |
| 2.2.3 血浆IGF-1 含量 | 第31-32页 |
| 2.2.4 持续高温应激下GRP94与IGF-1 相关性 | 第32页 |
| 2.2.5 持续高温应激下肝脏IGF-1 受体相关蛋白表达 | 第32-33页 |
| 2.2.6 持续高温应激下IGF-1 相关基因表达 | 第33-34页 |
| 2.3 讨论 | 第34-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 猪肝细胞内质网应激模型构建 | 第38-45页 |
| 3.1 材料方法 | 第38-39页 |
| 3.1.1 内质网应激细胞模型构建 | 第38-39页 |
| 3.1.2 RT-qPCR与 Western blot检测 | 第39页 |
| 3.1.3 细胞的抑制率检测 | 第39页 |
| 3.1.4 细胞周期检测 | 第39页 |
| 3.1.5 数据分析 | 第39页 |
| 3.2 结果 | 第39-43页 |
| 3.2.1 细胞抑制率 | 第40页 |
| 3.2.2 细胞周期 | 第40页 |
| 3.2.3 细胞内质网应激标志基因 | 第40页 |
| 3.2.4 细胞内质网应激标志蛋白 | 第40-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-44页 |
| 3.4 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 内质网应激条件下GRP94 低表达对猪肝细胞损伤、IGF-1 表达及泛素化的影响 | 第45-57页 |
| 4.1 材料方法 | 第45-48页 |
| 4.1.1 基因沉默慢病毒质粒载体构建 | 第45-46页 |
| 4.1.2 慢病毒包装及滴度测定 | 第46-47页 |
| 4.1.3 慢病毒介导的shRNA在永生化猪肝星状细胞中敲低GRP94 表达 | 第47页 |
| 4.1.4 内质网应激条件下敲低GRP94 表达 | 第47页 |
| 4.1.5 RT-qPCR及 Western blot检测基因和蛋白表达 | 第47-48页 |
| 4.1.6 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第48页 |
| 4.1.7 数据分析 | 第48页 |
| 4.2 结果 | 第48-56页 |
| 4.2.1 基因沉默慢病毒质粒载体构建 | 第48-49页 |
| 4.2.2 基因沉默慢病毒包装 | 第49-50页 |
| 4.2.3 GRP94-shRNA慢病毒转染对GRP94 抑制情况 | 第50-51页 |
| 4.2.4 GRP94-shRNA慢病毒转染对内质网应激相关基因表达的影响 | 第51-53页 |
| 4.2.5 GRP94-shRNA慢病毒转染对细胞凋亡的影响 | 第53-54页 |
| 4.2.6 GRP94-shRNA慢病毒转染对IGF-1 基因表达的影响 | 第54页 |
| 4.2.7 GRP94-shRNA慢病毒转染对泛素化的影响 | 第54-56页 |
| 4.3 讨论 | 第56页 |
| 4.4 小结 | 第56-57页 |
| 第五章 仔猪内质网应激模型的构建及细胞损伤、泛素化检测 | 第57-71页 |
| 5.1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 5.1.1 动物模型建立 | 第57-58页 |
| 5.1.2 RT-qPCR分析 | 第58页 |
| 5.1.3 Western blotting分析 | 第58页 |
| 5.1.4 H&E染色 | 第58页 |
| 5.1.5 血浆指标测定 | 第58页 |
| 5.1.6 肝脏及血浆中促炎症因子的测定 | 第58-59页 |
| 5.1.7 TUNEL测定凋亡率 | 第59页 |
| 5.1.8 数据分析 | 第59页 |
| 5.2 结果 | 第59-68页 |
| 5.2.1 仔猪内质网应激模型的建立 | 第59-61页 |
| 5.2.2 内质网应激对仔猪生产性能的影响 | 第61-62页 |
| 5.2.3 内质网应激下仔猪肝脏损伤 | 第62-64页 |
| 5.2.4 内质网应激下促炎症因子 | 第64-65页 |
| 5.2.5 内质网应激下补体系统 | 第65-66页 |
| 5.2.6 内质网应激下的肝细胞凋亡 | 第66-68页 |
| 5.2.7 内质网应激下的泛素化 | 第68页 |
| 5.3 讨论 | 第68-70页 |
| 5.4 小结 | 第70-71页 |
| 第六章 内质网应激下猪肝脏蛋白组学分析及GRP94与IGF-1 关系探索 | 第71-91页 |
| 6.1 材料与方法 | 第71-75页 |
| 6.1.1 试验主要仪器 | 第71页 |
| 6.1.2 试验主要试剂配制 | 第71-72页 |
| 6.1.3 试验材料 | 第72页 |
| 6.1.4 蛋白质提取及浓度测定 | 第72页 |
| 6.1.5 蛋白质酶解 | 第72-73页 |
| 6.1.6 iTRAQ定量标记 | 第73页 |
| 6.1.7 HLB固相萃取柱除盐 | 第73页 |
| 6.1.8 离线高pH反相高效液相色谱分离iTRAQ标记多肽 | 第73页 |
| 6.1.9 LC-MS/MS分析 | 第73-74页 |
| 6.1.10 定量分析 | 第74页 |
| 6.1.11 GRP94,IGF-1和PDIA3 检测 | 第74页 |
| 6.1.12 PRM验证差异蛋白 | 第74-75页 |
| 6.1.13 数据分析及生物信息学分析 | 第75页 |
| 6.2 结果 | 第75-88页 |
| 6.2.1 蛋白质样品质量控制 | 第75页 |
| 6.2.2 蛋白质鉴定结果 | 第75页 |
| 6.2.3 相关性分析 | 第75-76页 |
| 6.2.4 蛋白质差异蛋白 | 第76-77页 |
| 6.2.5 功能分析 | 第77-80页 |
| 6.2.6 内质网应激 | 第80-81页 |
| 6.2.7 代谢信号通路 | 第81-84页 |
| 6.2.8 补体凝血级联反应 | 第84-85页 |
| 6.2.9 GRP94与IGF-1 互作分析 | 第85-87页 |
| 6.2.10 PRM蛋白验证 | 第87-88页 |
| 6.3 讨论 | 第88-90页 |
| 6.4 小结 | 第90-91页 |
| 第七章 全文结论 | 第91-92页 |
| 7.1 结论 | 第91页 |
| 7.2 本论文创新点 | 第91页 |
| 7.3 下一步研究计划 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-105页 |
| 附录 | 第105-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简历 | 第120页 |
