摘要 | 第4-5页 |
abstract | 第5-6页 |
第1章 引言 | 第12-35页 |
1.1 G蛋白偶联受体(GPCR)概述 | 第12-24页 |
1.1.1 GPCR的分类 | 第13页 |
1.1.2 GPCR信号通路介绍 | 第13-15页 |
1.1.3 GPCR是重要的药物作用靶标 | 第15-17页 |
1.1.4 GPCR结构生物学研究现状 | 第17-23页 |
1.1.5 基于GPCR结构的药物设计 | 第23-24页 |
1.2 生长抑素Ⅱ型受体(SSTR2)简介 | 第24-29页 |
1.2.1 SSTR蛋白的发现和分类 | 第24-25页 |
1.2.2 SSTR蛋白在体内的分布及信号通路介绍 | 第25-26页 |
1.2.3 靶向SSTR蛋白的药物研发现状 | 第26-29页 |
1.3 结构生物学研究方法简介 | 第29-34页 |
1.3.1 X射线衍射法解析蛋白质结构 | 第29-31页 |
1.3.2 NMR法研究蛋白质结构 | 第31-32页 |
1.3.3 冷冻电镜(Cryo-EM)法解析蛋白质结构 | 第32-34页 |
1.4 本文的研究内容、目的、意义以及创新点 | 第34-35页 |
第2章 SSTR2蛋白的表达与纯化 | 第35-54页 |
2.1 材料与仪器 | 第35-36页 |
2.1.1 实验试剂和耗材 | 第35-36页 |
2.1.2 实验仪器 | 第36页 |
2.2 实验方法与流程 | 第36-44页 |
2.2.1 表达载体的构建 | 第36-40页 |
2.2.2 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 | 第40-41页 |
2.2.3 SSTR2蛋白的小量纯化 | 第41-44页 |
2.3 表达纯化结果与讨论 | 第44-54页 |
2.3.1 SSTR2蛋白表达载体的构建与优化 | 第44-45页 |
2.3.2 SSTR2蛋白的小量纯化 | 第45-50页 |
2.3.3 SSTR2蛋白的配体筛选 | 第50-54页 |
第3章 SSTR2蛋白与配体复合物晶体的生长与结构解析 | 第54-69页 |
3.1 材料与仪器 | 第54-55页 |
3.2 实验方法与流程 | 第55-59页 |
3.2.1 SSTR2蛋白的大量纯化 | 第55-56页 |
3.2.2 蛋白结晶方法简介 | 第56-58页 |
3.2.3荧光淬灭恢复(FRAP)实验 | 第58页 |
3.2.4 数据收集和结构解析方法 | 第58-59页 |
3.3 结果与讨论 | 第59-69页 |
3.3.1 SSTR2蛋白与配体复合物的大量纯化 | 第59-60页 |
3.3.2 SSTR2蛋白与CYN-154806复合物晶体的生长与优化 | 第60-64页 |
3.3.3 SSTR2蛋白与L-054,522复合物晶体的生长与优化 | 第64-66页 |
3.3.4 晶体衍射数据的收集与处理 | 第66-69页 |
第4章 SSTR2蛋白与配体复合物晶体结构的分析 | 第69-84页 |
4.1 材料与方法 | 第69-70页 |
4.1.1 材料、试剂与仪器 | 第69页 |
4.1.2 cAMP检测(cAMP Assay) | 第69页 |
4.1.3配体结合实验 | 第69-70页 |
4.2 SSTR2蛋白与拮抗剂CYN-154806复合物的结构分析 | 第70-72页 |
4.2.1 SSTR2与CYN-154806复合物晶体结构概览 | 第70-71页 |
4.2.2 CYN-154806的结合口袋分析 | 第71-72页 |
4.3 SSTR2蛋白与激动剂L-054,522复合物的结构分析 | 第72-84页 |
4.3.1 SSTR2与L-054,522复合物晶体结构概览 | 第72-73页 |
4.3.2 SSTR2与L-054,522复合物晶体结构的构象 | 第73-74页 |
4.3.3 SSTR2晶体结构中关键“motif”构象分析 | 第74-75页 |
4.3.4 L-054,522的结合口袋分析 | 第75-77页 |
4.3.5 N125~(3.35)在SSTR2蛋白激活过程中的作用 | 第77-81页 |
4.3.6 D89~(2.50)N突变对SSTR2蛋白的影响 | 第81-84页 |
第5章 结论与讨论 | 第84-88页 |
5.1 研究总结 | 第84-85页 |
5.2 待解决的问题 | 第85-86页 |
5.2.1 SSTR2与其天然配体间的结合模式 | 第85页 |
5.2.2 SSTR2的活性构象 | 第85-86页 |
5.2.3 SSTR2配体的选择性问题 | 第86页 |
5.3 前景与展望 | 第86-88页 |
第6章 博士期间其他工作 | 第88-100页 |
6.1 总论 | 第88页 |
6.2 神经激肽I型受体(NK1R)概述 | 第88-89页 |
6.3 神经激肽I型受体(NK1R)结构生物学研究意义 | 第89页 |
6.4 神经激肽I型受体(NK1R)的表达纯化以及预结晶 | 第89-99页 |
6.4.1 材料与仪器 | 第89页 |
6.4.2 实验方法与流程 | 第89-92页 |
6.4.3 实验结果 | 第92-99页 |
6.5 讨论 | 第99-100页 |
参考文献 | 第100-112页 |
附录1-人源SSTR2的基因和氨基酸序列 | 第112-113页 |
附录2-人源NK1R的基因和氨基酸序列 | 第113-114页 |
附录3-主要符号对照表 | 第114-115页 |
致谢 | 第115-118页 |
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第118页 |