首页--医药、卫生论文--中国医学论文--中药学论文--中药药理学论文--中药实验药理论文

天然产物衍生物P-13抑制STAT3信号通路以及治疗肝损伤的机理研究

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
第一章 天然产物衍生物P-13抑制STAT3信号通路的机理研究第13-60页
    第1节 引言第13-23页
        1.1 JAK/STAT信号通路第13-17页
            1.1.1 JAK/STAT信号通路组成第13-14页
            1.1.2 JAK/STAT信号通路转导第14-16页
            1.1.3 JAK/STAT信号通路调控第16-17页
        1.2 JAK/STAT信号通路与肿瘤第17-18页
        1.3 JAK/STAT信号通路的抑制剂第18-21页
            1.3.1 因子或者受体拮抗剂第19页
            1.3.2 JAK蛋白抑制剂第19-21页
            1.3.3 STAT蛋白抑制剂第21页
        1.4 天然化合物与抗肿瘤第21-23页
    第2节 实验材料与方法第23-33页
        2.1 实验材料第23-26页
            2.1.1 化合物及药品第23页
            2.1.2 试剂第23-24页
            2.1.3 抗体第24-25页
            2.1.4 细胞系和培养条件第25页
            2.1.5 常用溶液配制第25-26页
        2.2 实验方法第26-33页
            2.2.1 MTT噻唑蓝比色法第26页
            2.2.2 质粒转染第26-27页
            2.2.3 细胞周期流式检测第27页
            2.2.4 荧光素酶活性检测(Luciferase activity)第27-28页
            2.2.5 蛋白印迹(Western blot)分析第28页
            2.2.6 体外激酶活性检测第28-29页
            2.2.7 动物模型给药实验第29页
            2.2.8 化合物与谷胱甘肽的共价结合质谱检测第29-30页
            2.2.9 Cu(D-催化[3+2]叠氮-炔烃环加成(CuAAC)和Pull-down蛋白分析第30-31页
            2.2.10 观察肌动蛋白Actin的免疫荧光实验第31页
            2.2.11 蛋白质谱鉴定化合物结合位点第31-32页
            2.2.12 分子对接实验第32页
            2.2.13 细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量检测第32页
            2.2.14 结晶紫实验(Crystal Violet Staining Solution)第32页
            2.2.15 P-13与IKK-β蛋白对接第32-33页
    第3节 实验结果第33-57页
        3.1 天明精中量丰天然产物的活性筛选及结构优化第33-34页
        3.2 P-13是泛JAK激酶抑制剂第34-39页
            3.2.1 P-13抑制IL-6/STAT3调控的荧光素酶的表达第34-35页
            3.2.2 P-13抑制IL-6诱导的和组成型活化的STAT3蛋白酪氨酸705位点的磷酸化第35-37页
            3.2.3 P-13抑制IL-6诱导的JAK2蛋白Y1007/1008的磷酸化第37页
            3.2.4 P-13抑制体外全长JAK2蛋白的激酶活性第37-38页
            3.2.5 P-13抑制其它JAK家族蛋白的激活第38-39页
        3.3 P-13共价抑制JAK2第39-46页
            3.3.1 GSH或者DTT可以逆转P-13对IL-6/STAT3信号通路的抑制作用第39-40页
            3.3.2 P-13共价结合GSH第40页
            3.3.3 α,β不饱和羰基是P-13的关键活性结构第40-41页
            3.3.4 P-13不可逆地抑制IL-6/STAT3信号转导第41-42页
            3.3.5 P-13垂钓JAK2蛋白第42-44页
            3.3.6 P-13优先结合JAK2蛋白SH2结构域的Cysteine 452位点第44-45页
            3.3.7 P-13不抑制JAK2蛋白JH1激酶域的活性第45-46页
        3.4 P-13对STAT3信号通路的抑制具有一定选择性第46-52页
            3.4.1 P-13选择性地结合JAK家族蛋白第46-48页
            3.4.2 P-13不抑制RTK和ser/thr家族蛋白信号转导第48-50页
            3.4.3 P-13不破坏Actin的结构第50-51页
            3.4.4 P-13对细胞中ROS(Reactive oxygen species,ROS)和GSH的水平影响很小第51-52页
        3.5 P-13的体外体内抗肿瘤活性第52-55页
            3.5.1 P-13优先抑制具有本底组成型活化的STAT3的癌细胞生长并且诱导细胞凋亡第52-54页
            3.5.2 P-13抑制体内肿瘤生长第54-55页
        3.6 P-13与经典抗肿瘤药物联合应用具有协同作用第55-57页
    第4节 小结与讨论第57-60页
第二章 共价键化合物在中药治疗疾病中的功能和机理研究第60-112页
    第1节 引言第60-71页
        1.1 中草药第60-62页
            1.2.1 中草药中的活性分子第61页
            1.2.2 中草药中活性分子的结构特征第61-62页
        1.2 共价键化合物的特性第62-64页
            1.2.1 共价键化合物的反应过程第62-63页
            1.2.2 共价键化合物药物效应动力学(pharmacodynamics,PD)和药物代谢动力学(pharmacokinetics,PK)的关系第63-64页
        1.3 共价键化合物与蛋白间的相互作用时间第64-66页
            1.3.1 蛋白turnover第64-65页
            1.3.2 Compound pulse-chase法检测相互作用时间第65-66页
        1.4 刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)引起的急性肝损伤模型第66-70页
            1.4.1 ConA诱导急性肝损伤第66-67页
            1.4.2 参与ConA诱导的肝损伤中的关键细胞和炎症因子第67-70页
        1.5 本章要探究的问题第70-71页
    第2节 实验材料与方法第71-77页
        2.1 实验材料第71页
            2.1.1 试剂和抗体第71页
            2.1.2 细胞株及培养第71页
        2.2 实验方法第71-77页
            2.2.1 ConA诱导的急性肝损伤模型建立第71-72页
            2.2.2 动物组织免疫荧光实验第72-73页
            2.2.3 生化检测ALT/AST第73页
            2.2.4 Compound pulse-chase实验第73页
            2.2.5 动物组织标本HE (hematoxylin-eosin staining)染色第73-75页
            2.2.6 THP-1巨噬细胞诱导分化和刺激第75页
            2.2.7 RT-PCR第75-77页
    第3节 实验结果第77-107页
        3.1 共价键化合物广泛存在于植物和中草药第77-80页
            3.1.1 共价键化合物广泛存在于植物第77-78页
            3.1.2 共价键化合物广泛存在于中草药第78-80页
        3.2 P-alk与体外蛋白的相互作用第80-84页
            3.2.1 P-alk和不同靶点间的相互作用时间不同第80-82页
            3.2.2 蛋白酶体抑制剂bortezomib延长P-alk和靶点的相互作用时间第82-84页
            3.2.3 Bortezomib延长P-alk对IL-6/STAT3信号通路的抑制作用第84页
        3.3 共价键化合物具有累积效应第84-87页
            3.3.1 共价键化合物具有体积效应第84-85页
            3.3.2 P-alk具有重复给药的累积效应第85-87页
        3.4 P-alk在小鼠体内的分布情况第87-90页
            3.4.1 P-alk在Balb/c和C57BL/6J小鼠中组织的分布pattern相似第87-88页
            3.4.2 灌胃和尾静脉两种给药方式造成P-alk在组织中分布pattern不同第88页
            3.4.3 P-alk灌胃后富集在肝脏部位第88-89页
            3.4.4 P-alk尾静脉注射后均匀分布到各组织第89-90页
        3.5 P-alk逆转ConA诱导的急性肝损伤第90-96页
            3.5.1 P-alk体外抑制肝细胞中的IFN-γ/STAT1活化第90-91页
            3.5.2 P-alk结合肝脏蛋白,具有剂量依赖性第91-92页
            3.5.3 P-alk抑制肝脏中ConA诱导的JAK2/STAT1活化第92-95页
            3.5.4 P-alk逆转ConA诱导的肝损伤第95-96页
        3.6 P-alk和体内蛋白的相互作用第96-100页
            3.6.1 P-alk与不同组织蛋白的相互作用时间各不相同第96-98页
            3.6.2 P-alk和肝脏组织中JAKs蛋白相互作用时间第98-100页
        3.7 P-alk在肝脏JAK2蛋白上累积,具有剂量依赖性第100-104页
            3.7.1 250 mg/kg的P-alk重复给药在JAK2蛋白上累积第100-103页
            3.7.2 80 mg/kg的P-alk重复给药未能在JAK2蛋白上累积第103-104页
        3.8 含有α,β不饱和羰基的冬凌草甲素(Oridonin,Ori)治疗ConA诱导的肝损伤比非共价键的JAK2抑制剂Ruxolitinib (Ruxo)更有优势第104-107页
    第4节 小节与讨论第107-112页
参考文献第112-124页
附录第124-125页
致谢第125-128页
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果第128页

论文共128页,点击 下载论文
上一篇:雷公藤甲素及其衍生物雷腾舒药物代谢研究
下一篇:EGFRvⅢ靶向单克隆抗体CH12致食蟹猴特异性血小板减少的分子机制研究