| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 RNA干扰技术 | 第11-14页 |
| 1.1.1 RNA干扰的发现 | 第11-12页 |
| 1.1.2 RNA干扰的作用机制 | 第12-13页 |
| 1.1.3 RNA干扰的特点 | 第13-14页 |
| 1.1.4 RNA干扰在肿瘤治疗中的研究 | 第14页 |
| 1.2 跨界基因沉默技术 | 第14-16页 |
| 1.3 单增李斯特菌的概述 | 第16-18页 |
| 1.4 选题的目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-25页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.2 质粒与工具酶 | 第20页 |
| 2.1.3 菌种和细胞株 | 第20页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.5 试剂与耗材 | 第20-21页 |
| 2.1.6 抗体 | 第21页 |
| 2.1.7 引物 | 第21-22页 |
| 2.1.8 其他溶液及配置 | 第22-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 点突变质粒构建 | 第25-28页 |
| 2.2.2 检测突变型质粒LLO蛋白在BL21(DE3)中的表达 | 第28-30页 |
| 2.2.3 血平板实验 | 第30-31页 |
| 2.2.4 体外溶血活性检测 | 第31-32页 |
| 2.2.5 细胞培养 | 第32页 |
| 2.2.6 细菌侵染细胞 | 第32-33页 |
| 2.2.7 MTT检测 | 第33-34页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-47页 |
| 3.1 七种突变型质粒的成功构建 | 第35-39页 |
| 3.1.1 重叠PCR扩增出含有突变点的目的序列 | 第35-36页 |
| 3.1.2 双酶切含有突变点的目的基因片段 | 第36-37页 |
| 3.1.3 测序结果获得正确的九种突变型质粒 | 第37-39页 |
| 3.2 九种突变型跨界基因沉默菌株的构建及检测 | 第39-43页 |
| 3.2.1 九种突变型跨界基因沉默菌株的成功构建 | 第39-40页 |
| 3.2.2 Western-blot检测到九种突变型跨界基因沉默菌株LLO蛋白的正常表达 | 第40-41页 |
| 3.2.3 吖啶橙染色检测到九种突变型跨界基因沉默菌株能成功侵染SW480细胞 | 第41-43页 |
| 3.3 筛选具有减毒效果的突变型跨界基因沉默菌株 | 第43-47页 |
| 3.3.1 血平板实验初步检测各突变型跨界基因沉默菌株的溶血活性 | 第43-44页 |
| 3.3.2 体外溶血实验筛选出减毒突变型跨界基因沉默菌株 | 第44-45页 |
| 3.3.3 MTT实验最终确定减毒突变型跨界基因沉默菌株 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录一 英文缩写表 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第57-58页 |
