| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| abstract | 第9-11页 |
| 缩略词及中英文对照 | 第17-19页 |
| 文献综述 | 第19-29页 |
| 1 EGCG的研究作用 | 第20-23页 |
| 1.1 EGCG的结构 | 第20页 |
| 1.2 EGCG的功能活性 | 第20-23页 |
| 1.2.1 EGCG的抗氧化作用 | 第21页 |
| 1.2.2 EGCG的抗肿瘤作用 | 第21-22页 |
| 1.2.3 EGCG的抗病毒和抑菌作用 | 第22页 |
| 1.2.4 EGCG的降血脂、降血压和降血糖作用 | 第22-23页 |
| 2 犬肝脏脂代谢及腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路 | 第23-24页 |
| 2.1 犬肝细胞 | 第23页 |
| 2.2 AMPK的结构 | 第23-24页 |
| 2.3 AMPK活性调节 | 第24页 |
| 3 肝脏脂代谢与AMPK信号转导通路 | 第24-27页 |
| 3.1 肝脏脂代谢与PPARα | 第24-25页 |
| 3.2 肝脏脂代谢与SREBP-1c | 第25-26页 |
| 3.3 肝脏脂代谢及AMPK/ACC信号转导通路 | 第26-27页 |
| 4 EGCG调节脂代谢中AMPK信号通路 | 第27-29页 |
| 4.1 EGCG调控脂代谢 | 第27页 |
| 4.2 EGCG与AMPK信号通路 | 第27-29页 |
| 引言 | 第29-30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-43页 |
| 1.1 试验动物 | 第30页 |
| 1.2 实验材料与仪器设备 | 第30-32页 |
| 1.3 幼犬肝细胞的分离培养 | 第32-34页 |
| 1.3.1 肝细胞分离培养所用试剂配制 | 第32-33页 |
| 1.3.2 肝细胞分离培养 | 第33页 |
| 1.3.3 肝细胞培养时间梯度实验 | 第33页 |
| 1.3.4 肝细胞形态学观察 | 第33-34页 |
| 1.4 肝细胞处理与分组 | 第34页 |
| 1.4.1 作用时间试验 | 第34页 |
| 1.4.2 浓度梯度实验 | 第34页 |
| 1.5 犬肝细胞脂代谢转录因子和脂代谢基因mRNA的表达水平检测 | 第34-36页 |
| 1.5.1 引物的设计和合成 | 第34-35页 |
| 1.5.2 总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 1.5.3 反转录 | 第36页 |
| 1.5.4 qRT-PCR扩增 | 第36页 |
| 1.6 犬肝细胞中的AMPK信号通路关键分子蛋白表达水平检测 | 第36-38页 |
| 1.6.1 犬肝细胞蛋白提取和浓度测定 | 第36页 |
| 1.6.2 WesternBlotting检测AMPK信号通路相关蛋白表达量 | 第36-38页 |
| 1.7 犬肝细胞中PPARα、SREBP-1c的转录活性检测 | 第38-41页 |
| 1.7.1 核蛋白制备 | 第38页 |
| 1.7.2 蛋白定量 | 第38-39页 |
| 1.7.3 凝胶的配制 | 第39页 |
| 1.7.4 EMSA结合反应 | 第39页 |
| 1.7.5 电泳分析 | 第39-40页 |
| 1.7.6 电转膜 | 第40页 |
| 1.7.7 紫外交联 | 第40页 |
| 1.7.8 化学发光法检测生物素标记的探针 | 第40-41页 |
| 1.8 犬肝细胞中PPARα和SREBP-1c在核质内的分布检测 | 第41页 |
| 1.8.1 肝细胞爬片的制备和肝细胞的接种 | 第41页 |
| 1.8.2 细胞免疫荧光的步骤 | 第41页 |
| 1.9 犬肝细胞中的AMPKα、ACCα、CPTI酶活性的检测 | 第41-42页 |
| 1.10 犬肝细胞中ATP、AMP含量检测 | 第42页 |
| 1.11 犬肝细胞中TG、VLDL含量检测 | 第42页 |
| 1.12 数据统计分析 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-57页 |
| 2.1 犬原代肝细胞分离培养结果 | 第43-46页 |
| 2.1.1 犬原代肝细胞分离培养过程 | 第43-44页 |
| 2.1.2 原代肝细胞生长状态观察 | 第44页 |
| 2.1.3 原代肝细胞培养基的生化指标 | 第44-45页 |
| 2.1.4 原代肝细胞的电镜图 | 第45-46页 |
| 2.2 EGCG对肝细胞AMPKα磷酸化的时间效应 | 第46页 |
| 2.3 EGCG激活犬肝细胞AMP和ATP的影响 | 第46-47页 |
| 2.4 EGCG激活犬肝细胞AMPKα信号通路 | 第47-48页 |
| 2.5 EGCG对肝细胞PPARα和SREBP-1c基因和蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| 2.6 EGCG对肝细胞中PPARα和SREBP-1c的转录活性的影响 | 第49-50页 |
| 2.7 EGCG对肝细胞中PPARα和SREBP-1c的核质分布的影响 | 第50-52页 |
| 2.8 EGCG对肝细胞脂氧化关键酶基因和蛋白表达水平的影响 | 第52-53页 |
| 2.9 EGCG对肝细胞脂合成关键酶基因和蛋白表达水平的影响 | 第53-55页 |
| 2.10 EGCG对肝细胞ACCα表达和CPTI酶活性的影响 | 第55-56页 |
| 2.11 EGCG对肝细胞中TG和VLDL含量的影响 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-63页 |
| 3.1 犬肝细胞分离培养结果分析 | 第57页 |
| 3.2 EGCG对肝细胞脂代谢的影响 | 第57-58页 |
| 3.3 EGCG对肝细胞AMPKα信号通路的影响 | 第58-63页 |
| 4 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 附录 | 第73-80页 |
| 附录A 引物验证PCR电泳图 | 第73-74页 |
| 附录B 荧光定量PCR结果 | 第74-80页 |
| 作者简介 | 第80-81页 |
