| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-16页 |
| 1.1 梅花鹿与鹿茸 | 第9页 |
| 1.2 PTN的研究概况 | 第9-13页 |
| 1.2.1 PTN结构与功能 | 第10-11页 |
| 1.2.2 PTN与肿瘤的相关性 | 第11-12页 |
| 1.2.3 PTN受体及信号通路 | 第12-13页 |
| 1.3 PTN基因与其他基因的互作研究 | 第13-14页 |
| 1.3.1 PTN与HOXA5的互作 | 第13-14页 |
| 1.3.2 PTN与MMP3、MMP10的互作 | 第14页 |
| 1.3.3 PTN与EGF的互作 | 第14页 |
| 1.4 试验目的及意义 | 第14-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-32页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-21页 |
| 2.1.1 试验样品采集 | 第16页 |
| 2.1.2 主要药品试剂配制 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.1.4 试验试剂 | 第18页 |
| 2.1.5 主要生物学在线网站和生物学分析软件 | 第18-20页 |
| 2.1.6 试验所用的载体 | 第20页 |
| 2.1.7 试验引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 梅花鹿鹿茸组织总RNA提取及反转录 | 第21-23页 |
| 2.2.2 梅花鹿PTN基因克隆 | 第23-26页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR检测PTN基因在鹿茸不同生长时期表达情况 | 第26-27页 |
| 2.2.4 真核表达载体构建 | 第27-29页 |
| 2.2.5 细胞培养 | 第29-31页 |
| 2.2.6 细胞瞬时转染 | 第31页 |
| 2.2.7 细胞总RNA提取纯化及反转录 | 第31页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR检测PTN及相关基因表达情况 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-44页 |
| 3.1 梅花鹿鹿茸组织总RNA提取结果 | 第32页 |
| 3.2 梅花鹿PTN基因克隆及酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.1 PTN基因的扩增与阳性克隆 | 第32-33页 |
| 3.2.2 重组质粒pMD-18T-PTN的双酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.3 PTN基因的测序及序列分析 | 第33-39页 |
| 3.3.1 开放阅读框(ORF) | 第33-34页 |
| 3.3.2 PTN蛋白一级结构分析 | 第34-36页 |
| 3.3.3 PTN蛋白二级结构预测分析 | 第36-37页 |
| 3.3.4 PTN蛋白三级结构预测分析 | 第37-38页 |
| 3.3.5 PTN蛋白氨基酸多序列比对 | 第38-39页 |
| 3.3.6 构建系统进化树 | 第39页 |
| 3.4 PTN基因在鹿茸不同生长时期表达的相对定量结果 | 第39-40页 |
| 3.5 真核表达载体构建 | 第40-41页 |
| 3.5.1 pEGFP-C1真核表达质粒的双酶切 | 第40页 |
| 3.5.2 pEGFP-C1-PTN重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 3.5.3 pEGFP-C1-PTN重组质粒的双酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.5.4 pEGFP-C1-PTN重组质粒测序 | 第41页 |
| 3.6 转染细胞的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.7 细胞总RNA提取 | 第42页 |
| 3.8 Real-time PCR检测结果 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-48页 |
| 4.1 PTN基因克隆测序及生物信息分析 | 第44页 |
| 4.2 PTN基因在鹿茸不同生长时期表达分析 | 第44-45页 |
| 4.3 PTN真核表达载体构建 | 第45-46页 |
| 4.4 PTN真核表达载体在293T细胞中的表达 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
